Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания прямого билирубина в сыворотке или плазме крови человека «прямой билирубин — UTS»
по применению набора реагентов для количественного определения содержания прямого билирубина в сыворотке или плазме крови человека
Набор реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН — UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05455
Информация для заказа набора «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН — UTS»
*v – объем фотометрической ячейки анализатора.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН — UTS» предназначен для определения содержания прямого билирубина в сыворотке или плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Билирубин является продуктом распада гемоглобина и присутствует в свободной и конъюгированной формах в организме человека. При распаде гемоглобина первоначально образуется гидрофобный (нерастворим в воде), липофильный (жирорастворимый, токсичный) свободный билирубин, в плазме крови он присутствует в основном в комплексе «альбумин-билирубин». Далее комплекс «альбумин-билирубин» транспортируется в печень, в клетках которой свободный билирубин при участии фермента связывается с глюкуроновой кислотой. В результате этого процесса (конъюгации) образуется конъюгированный (прямой) билирубин (водорастворимый и менее токсичный), который активно против градиента концентрации экскретируется в желчные ходы и в составе желчи поступает в кишечник. В норме в крови человека 75% общего билирубина приходится на долю свободного билирубина и 25% на долю прямого (связанного) билирубина.
1.3. Увеличение содержания прямого билирубина в крови может обуславливаться многими причинами: увеличение интенсивности гемолиза эритроцитов; поражение паренхимы печени с нарушением ее билирубинвыделительной функции; нарушение оттока желчи из желчных путей в кишечник. На этом основано клиническое значение анализа [1].
1.4. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13..
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Определение прямого билирубина основано на реакции диазотирования билирубина диазосульфаниловой кислотой (метод Ендрашика) в результате чего образуется соединение азобилирубин розового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в пробе и измеряется спектрофотометрически при нм [2,3,4]. Прямой билирубин взаимодействует с диазосульфаниловой кислотой в водной среде непосредственно.
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 540 нм молекулами окрашенного азобилирубина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски азобилирубина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации прямого билирубина в исследуемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Для проведения реакции диазотирования набор реагентов «ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН-UTS» поставляется в виде двух растворов Реагент Р1и Реагент Р2.
источник
Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания общего и прямого билирубина в сыворотке крови
по применению набора реагентов для количественного определения содержания
общего и прямого билирубина в сыворотке крови
Набор предназначен для количественного определения содержания общего и прямого (конъюгированного) билирубина в сыворотке крови человека в клинико-дигностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор выпускается в двух видах фасовки, рассчитанных на проведение 300 и 300 или 100 и 100 определений общего и прямого билирубина при расходе 1,0 мл рабочего реагента или реагента 3 на один анализ, соответственно.
Прямой (коньюгированный) билирубин взаимодействует с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием окрашенного азосоединения, интенсивность окраски которого измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.
Общий билирубин (прямой и неконьюгированный) в присутствии диазотированного дихлоранилина вступает в реакцию азосочетания и образует окрашенный в красный цвет комплекс азокрасителя в кислом растворе, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию билирубина в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.
1. Реагент 1: раствор, содержащий 2,4-дихлоранилин, 0,75 ммоль/л; соляную кислоту, 20 ммоль/л; тезит, 15 г/л — 3 флакона (по 100 мл) или 1 флакон (100 мл);
2. Реагент 2: раствор нитрита натрия, 75 ммоль/л — 3 флакона (по 3,0 мл) или 1 флакон (3,0 мл);
3. Реагент 3: раствор, содержащий сульфаниловую кислоту, 29 ммоль/л; соляную кислоту, 17 ммоль/л — 3 флакона (по 100 мл) или 1 флакон (100 мл);
4. Калибратор — билирубин-лиофилизат (концентрация билирубина в калибраторе «а», мкмоль/л, указана на этикетке флакона) — 1 флакон (1,0 мл).
Набор обеспечивает линейную область определения концентрации билирубина в диапазоне от 4,0 до 510 мкмоль/л, отклонение от “линейности” не превышает 7%. Чувствительность определения — не более 3,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений — не более 7%.
Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные величины концентрации билирубина в сыворотке крови человека составляют: общий билирубин — 8,5 — 20,5 мкмоль/л; прямой билирубин — 2,2 — 5,1 мкмоль/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.
Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови.
В реагенте 2 содержится токсичный компонент нитрит натрия, реагенты 1 и 3 содержат соляную кислоту. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т. к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
— Спектрофотометр, программируемый фотометр или биохимический анализатор, длина волны 546(500-560) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;
— пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02; 0,1 и 1,0 мл;
– цилиндр стеклянный мерный вместимостью 100 мл;
— пробирки стеклянные вместимостью 3,0 – 5,0 мл;
— колба коническая вместимостью 200 мл;
— 0,9% раствор NaCI (физиологический раствор);
— перчатки резиновые или пластиковые.
Приготовление рабочего реагента для определения общего билирубина. Смешать в колбе конической вместимостью 200 мл необходимые объемы реагентов 1 и 2 в соотношении 100:1, полученный реагент выдержать в темном месте при комнатной температуре (+18-25°С) не менее 15 минут. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно после каждого использования.
Рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8°С не более трех недель или при комнатной температуре — не более 10 суток.
Приготовление калибратора. Во флакон с калибратором внести 1,0 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона растворить при осторожном перемешивании при комнатной температуре (+18-25°С). Полученный калибратор содержит «а» мкмоль/л билирубина. Концентрация билирубина («а» мкмоль/л) в калибраторе указана на этикетке флакона.
Калибратор можно хранить в темном месте при температуре +2-8°С не более 1 суток.
Реагенты 2 и 3 для определения прямого билирубина готовы к использованию.
Определение общего билирубина
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице 1.
источник
Инструкция по применению Набора реагентов для количественного определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови человека «Общий билирубин — UTS»
по применению Набора реагентов для количественного определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови человека
Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН — UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05453
Информация для заказа набора «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН — UTS»
Р1 80 мл + Р2 20 мл + калибратор
Р1 320 мл + Р2 80 мл + калибратор
где v – объем фотометрической ячейки анализатора.
ВНИМАНИЕ! Изменено соотношение компонентов набора. Рабочий реагент готовить смешиванием Реагента 1 (Р1) и Реагента 2 (Р2) в соотношении (4 : 1).
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН — UTS» предназначен для определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Билирубин является продуктом распада гемоглобина и присутствует в свободной и прямой (конъюгированной) формах в организме человека. При распаде гемоглобина первоначально образуется гидрофобный (нерастворим в воде), липофильный (жирорастворимый, токсичный) свободный билирубин, в плазме крови он присутствует в основном в комплексе «альбумин-билирубин». Далее комплекс «альбумин-билирубин» транспортируется в печень, в клетках которой свободный билирубин ферментативно связывается с глюкуроновой кислотой. В результате этого процесса (конъюгации) образуется конъюгированный (прямой) билирубин (водорастворимый и менее токсичный), который активно против градиента концентрации экскретируется в желчные ходы и в составе желчи поступает в кишечник. В норме в крови человека 75% общего билирубина приходится на долю свободного билирубина и 25% на долю прямого (связанного) билирубина.
1.3. Увеличение содержания билирубина в крови может обуславливаться многими причинами: увеличение интенсивности гемолиза эритроцитов; поражение паренхимы печени с нарушением ее билирубинвыделительной функции; нарушение оттока желчи из желчных путей в кишечник. На этом основано клиническое значение анализа [1].
1.4. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13..
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Определение общего билирубина (свободного и прямого) основано на реакции диазотирования билирубина диазосульфаниловой кислотой, в результате чего образуется соединение азобилирубин розового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в пробе и измеряется спектрофотометрически при нм [2,3,4]. Прямой билирубин взаимодействует с диазосульфаниловой кислотой в водной среде, в то время как свободный билирубин необходимо перевести в водорастворимую форму с помощью диметилсульфоксида.
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 540 нм молекулами окрашенного азобилирубина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски азобилирубина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации общего билирубина в исследуемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН-UTS» поставляется в виде двух растворов Р1, Р2 и лиофилизированного калибратора.
источник
Инструкция по применению Набора реагентов для количественного определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови человека «Общий билирубин — UTS»
по применению Набора реагентов для количественного определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови человека
Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН — UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05453
Информация для заказа набора «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН — UTS»
Р1 80 мл + Р2 20 мл + калибратор
Р1 320 мл + Р2 80 мл + калибратор
где v – объем фотометрической ячейки анализатора.
ВНИМАНИЕ! Изменено соотношение компонентов набора. Рабочий реагент готовить смешиванием Реагента 1 (Р1) и Реагента 2 (Р2) в соотношении (4 : 1).
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН — UTS» предназначен для определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Билирубин является продуктом распада гемоглобина и присутствует в свободной и прямой (конъюгированной) формах в организме человека. При распаде гемоглобина первоначально образуется гидрофобный (нерастворим в воде), липофильный (жирорастворимый, токсичный) свободный билирубин, в плазме крови он присутствует в основном в комплексе «альбумин-билирубин». Далее комплекс «альбумин-билирубин» транспортируется в печень, в клетках которой свободный билирубин ферментативно связывается с глюкуроновой кислотой. В результате этого процесса (конъюгации) образуется конъюгированный (прямой) билирубин (водорастворимый и менее токсичный), который активно против градиента концентрации экскретируется в желчные ходы и в составе желчи поступает в кишечник. В норме в крови человека 75% общего билирубина приходится на долю свободного билирубина и 25% на долю прямого (связанного) билирубина.
1.3. Увеличение содержания билирубина в крови может обуславливаться многими причинами: увеличение интенсивности гемолиза эритроцитов; поражение паренхимы печени с нарушением ее билирубинвыделительной функции; нарушение оттока желчи из желчных путей в кишечник. На этом основано клиническое значение анализа [1].
1.4. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13..
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Определение общего билирубина (свободного и прямого) основано на реакции диазотирования билирубина диазосульфаниловой кислотой, в результате чего образуется соединение азобилирубин розового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в пробе и измеряется спектрофотометрически при нм [2,3,4]. Прямой билирубин взаимодействует с диазосульфаниловой кислотой в водной среде, в то время как свободный билирубин необходимо перевести в водорастворимую форму с помощью диметилсульфоксида.
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 540 нм молекулами окрашенного азобилирубина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски азобилирубина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации общего билирубина в исследуемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН-UTS» поставляется в виде двух растворов Р1, Р2 и лиофилизированного калибратора.
источник
Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания общего и прямого билирубина в сыворотке крови
по применению набора реагентов для количественного определения содержания
общего и прямого билирубина в сыворотке крови
Набор предназначен для количественного определения содержания общего и прямого (конъюгированного) билирубина в сыворотке крови человека в клинико-дигностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор выпускается в двух видах фасовки, рассчитанных на проведение 300 и 300 или 100 и 100 определений общего и прямого билирубина при расходе 1,0 мл рабочего реагента или реагента 3 на один анализ, соответственно.
Прямой (коньюгированный) билирубин взаимодействует с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием окрашенного азосоединения, интенсивность окраски которого измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.
Общий билирубин (прямой и неконьюгированный) в присутствии диазотированного дихлоранилина вступает в реакцию азосочетания и образует окрашенный в красный цвет комплекс азокрасителя в кислом растворе, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию билирубина в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.
1. Реагент 1: раствор, содержащий 2,4-дихлоранилин, 0,75 ммоль/л; соляную кислоту, 20 ммоль/л; тезит, 15 г/л — 3 флакона (по 100 мл) или 1 флакон (100 мл);
2. Реагент 2: раствор нитрита натрия, 75 ммоль/л — 3 флакона (по 3,0 мл) или 1 флакон (3,0 мл);
3. Реагент 3: раствор, содержащий сульфаниловую кислоту, 29 ммоль/л; соляную кислоту, 17 ммоль/л — 3 флакона (по 100 мл) или 1 флакон (100 мл);
4. Калибратор — билирубин-лиофилизат (концентрация билирубина в калибраторе «а», мкмоль/л, указана на этикетке флакона) — 1 флакон (1,0 мл).
Набор обеспечивает линейную область определения концентрации билирубина в диапазоне от 4,0 до 510 мкмоль/л, отклонение от “линейности” не превышает 7%. Чувствительность определения — не более 3,0 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определений — не более 7%.
Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные величины концентрации билирубина в сыворотке крови человека составляют: общий билирубин — 8,5 — 20,5 мкмоль/л; прямой билирубин — 2,2 — 5,1 мкмоль/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.
Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови.
В реагенте 2 содержится токсичный компонент нитрит натрия, реагенты 1 и 3 содержат соляную кислоту. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т. к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
— Спектрофотометр, программируемый фотометр или биохимический анализатор, длина волны 546(500-560) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;
— пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02; 0,1 и 1,0 мл;
– цилиндр стеклянный мерный вместимостью 100 мл;
— пробирки стеклянные вместимостью 3,0 – 5,0 мл;
— колба коническая вместимостью 200 мл;
— 0,9% раствор NaCI (физиологический раствор);
— перчатки резиновые или пластиковые.
Приготовление рабочего реагента для определения общего билирубина. Смешать в колбе конической вместимостью 200 мл необходимые объемы реагентов 1 и 2 в соотношении 100:1, полученный реагент выдержать в темном месте при комнатной температуре (+18-25°С) не менее 15 минут. Тщательно закрыть флаконы с реагентами 1 и 2 непосредственно после каждого использования.
Рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8°С не более трех недель или при комнатной температуре — не более 10 суток.
Приготовление калибратора. Во флакон с калибратором внести 1,0 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона растворить при осторожном перемешивании при комнатной температуре (+18-25°С). Полученный калибратор содержит «а» мкмоль/л билирубина. Концентрация билирубина («а» мкмоль/л) в калибраторе указана на этикетке флакона.
Калибратор можно хранить в темном месте при температуре +2-8°С не более 1 суток.
Реагенты 2 и 3 для определения прямого билирубина готовы к использованию.
Определение общего билирубина
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице 1.
источник