Билирубин общий прямой витал

БИЛИРУБИН ОБЩИЙ fast 100 АГАТ

ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения
общего билирубина в сыворотке крови
модифицированным методом Ендрашика-Грофа

НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного колориметрического определения концентрации билирубина в сыворотке крови человека модифицированным методом Ендрашика-Грофа в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

Набор рассчитан на проведение 100 определений при расходе 1,0 мл рабочего раствора на один анализ, включая холостые пробы.

ПРИНЦИП МЕТОДА
Билирубины, прямой (коньюгирован с глюкоронатом) и непрямой (неконьюгированый, связанный с альбумином), в присутствии кофеина и детергента, соединяются с диазотированной сульфаниловой кислотой. Образуется азосоединение, окрашенное в красный цвет, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.

Термины «прямой» и «общий» относятся к реакционным характеристикам сывороточного билирубина в отсутствии или присутствии растворяющего (ускоряющего) реагента (акселератора), которые только приблизительно являются эквивалентами коньюгированной и неконьюгированной фракций билирубина.

СОСТАВ НАБОРА
1. АТ реактив, (сульфаниловая кислота – 14 ммоль/л, соляная кислота – 100 ммоль/л, кофеин – 200 ммоль/л, бензоат натрия – 420 ммоль/л, детергент Brij 35–35 г/л), 100 мл – 2 флакона;
2. ВТ реактив (нитрит натрия – 310 ммоль/л), 10 мл – 1 флакон;
3. Калибратор (лиофильно высушенный раствор билирубина в альбумине с концентрацией в интервале 100–130 мкмоль/л), 2 мл – 1 флакон.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Линейная область определения концентрации билирубина: 8–452 мкмоль/л, отклонение от линейности – не более 8%.
Чувствительность определения: не более 3 мкмоль/л.
Воспроизводимость: коэффициент вариации – не более 8%.

Нормальные величины концентрации общего билирубина в сыворотке крови составляют:
– для взрослых: до 8,5–20,5 мкмоль/л;
– при рождении: до 85,5 мкмоль/л;
– для новорожденных (5 дней): до 205 мкмоль/л;
– для новорожденных (1 месяц): до 25,6 мкмоль/л.

Качество набора можно оценивать по контрольным сывороткам отечественного или зарубежного производства, аттестованным данным методом. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
АТ реактив содержит едкие вещества. В случае попадания раствора на кожу и (или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается. Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. При работе с сывороткой или плазмой крови необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированые.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
– Анализатор, спектрофотометр, или фотометр, длина волны волны 546 нм или светофильтр в диапазоне 520–560 нм;
– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,1 и 1,0 мл;
– пробирки центрифужные или флаконы вместимостью 5–10 мл;
– секундомер;
– вода дистиллированная;
– перчатки резиновые или пластиковые.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Свежая негемолизированная сыворотка крови, свежая плазма стабилизированная ЭДТА или гепарином. Билирубин стабилен в течение 3-х дней при хранении при +2–8° С при хранении образца в защищенном от света месте.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА
АТ и ВТ реактивы. Растворы готовы к применению.
Калибратор. Аккуратно вскрыть флакон с лиофилизатом. Добавить точно 2,0 мл дистиллированной воды. Перемешать, не допуская вспенивания. Через 10 минут калибратор готов к применению. Точная концентрация указана на флаконе.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Компоненты реакционной смеси внести в пробирки в количествах, указанных в таблице:

Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать при температуре +18–25° С в течение 10–30 минут *. Измерения проводить при длине волны 546 (520–560) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Измерить величину оптической плотности калибровочной Ек и опытных проб Еоп против соответствующих холостых проб. Окраска устойчива в течение 1,5 часов после окончания инкубации.

Определить по калибратору билирубина фактор (F) по формуле:

где: Ск – концентрация билирубина в калибраторе (указана на флаконе), мкмоль/л;
Eк – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.
Содержание общего билирубина определить по формуле:

где: Eоп – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.
F – фактор пересчета оптической плотности в мкмоль/л.

Примечание: При проведении большого количества анализов для удобства работы можно смешать реактивы АТ и ВТ в соотношении 20:1 и полученный рабочий раствор использовать в течение 8 часов.

* Допускается использование термостатируемой кюветы, т.е. проведение анализа при +37° С.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25° С не более 5 суток.
АТ и ВТ реактивы после вскрытия флаконов могут храниться в укупоренном виде при температуре +2–25° С в течение всего срока годности набора.

Калибратор во флаконе может храниться в укупоренном виде в течение 8 часов при +25° С, 3-х суток при +2–8° С, или 2 недели при –20° С после разведения. Хранить в темном месте!

При концентрации билирубина выше, чем 452 мкмоль/л, исследуемый образец необходимо развести раствором натрия хлористого 9 г/л в соотношении 1:1, повторить анализ, полученный результат умножить на 2.

Срок хранения 2 года при +2–8° С.
Инструкция по применению набора под биохимические анализаторы высылается по запросу.

По вопросам, касающимся приобретения наборов и их качества, просим обращаться по адресу: 105173, г. Москва, ул. Западная, д. 2, стр. 1, ООО «Агат–Мед». Телефон для справок: (495) 777-41-92.

Инструкция составлена: В.В. Гладуном – главным технологом ООО «Агат-Мед», И.В. Тишкиной – научным сотрудником ООО «Агат-мед», И.В. Смирновым – зав. лабораторией ГНЦ РАМН.

Контрольная сыворотка Биоконт-С

Контрольная сыворотка Биоконт-С

Масло иммерсионное для микроскопии

Стабилизированный концентрированный раствор гемоглобина и контрольные материалы на его основе

источник

Билирубин и его фракции (общий, прямой, непрямой)

Анализ, в ходе которого определяется содержание в крови желчных пигментов и их фракций. Они являются метаболитами распада гемоглобина, и их уровень повышается при усиленном разрушении эритроцитов, нарушении функции печени и желчевыводящих путей.

Результаты исследований выдаются с бесплатным комментарием врача.

Колориметрический фотометрический метод.

Мкмоль/л (микромоль на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Билирубин – желтый пигмент, который является компонентом желчи и образуется в селезенке и костном мозге при распаде эритроцитов. В норме эритроциты разрушаются через 110-120 дней после выхода из костного мозга. При этом из погибших клеток высвобождается металлопротеин гемоглобин, состоящий из железосодержащей части – гема и белкового компонента – глобина. От гема отщепляется железо, которое повторно используется в качестве необходимого компонента ферментов и других белковых структур, а гемовые белки превращаются в билирубин. Непрямой (неконъюгированный) билирубин с помощью альбуминов доставляется кровью в печень, где благодаря ферменту глюкуронилтрансферазе соединяется с глюкуроновой кислотой и образует прямой (конъюгированный) билирубин. Процесс превращения водонерастворимого билирубина в водорастворимый называется конъюгацией. Связанная фракция пигмента практически не поступает в кровь и в норме экскретируется с желчью. Билирубин в просвете кишечника под действием бактерий кишечника метаболизируется и выводится с калом, придавая ему темную окраску.

Прямой билирубин назван так в связи с методикой лабораторного исследования. Данный водорастворимый пигмент непосредственно взаимодействует с реактивами (диазореактивом Эрлиха), добавленными в пробу крови. Неконъюгированный (непрямой, свободный) билирубин нерастворим в воде, и для его определения необходимы дополнительные реактивы.

В норме за сутки в человеческом организме вырабатывается 250-350 мг билирубина. Выработка более 30-35 мкмоль/л проявляется желтушностью кожных покровов и склер. По механизму развития желтухи и преобладанию фракций билирубина в крови выделяют надпеченочную (гемолитическую), печеночную (паренхиматозную) или подпеченочную (механическую, обтурационную) желтуху.

При повышенном разрушении эритроцитов (гемолизе) или нарушенном захвате печенью желчного пигмента увеличивается содержание билирубина за счет неконъюгированной фракции без повышения уровня связанного пигмента (надпеченочная желтуха). Данная клиническая ситуация наблюдается при некоторых врождённых состояниях, связанных с нарушением конъюгации билирубина, например при синдроме Жильбера.

При наличии преграды на пути выхода желчи в двенадцатиперстную кишку или нарушениях желчевыделения в крови повышается прямой билирубин, что нередко является признаком обтурационной (механической) желтухи. При обструкции желчевыводящих путей прямой билирубин попадает в кровь, а затем и в мочу. Он является единственной фракцией билирубина, способной выделяться почками и окрашивать мочу в темный цвет.

Увеличение билирубина за счет прямой и непрямой фракции указывает на заболевание печени с нарушением захвата и выделения желчных пигментов.

Повышение непрямого билирубина нередко наблюдается у новорождённых в первые 3 дня жизни. Физиологическая желтуха связана с повышенным распадом эритроцитов с фетальным гемоглобином и недостаточной зрелостью ферментных систем печени. При затянувшейся желтухе у новорождённых необходимо исключать гемолитическую болезнь и врождённую патологию печени и желчевыводящих путей. При конфликте групп крови матери и ребенка возникает повышенный распад эритроцитов малыша, что приводит к повышению непрямого билирубина. Неконъюгированный билирубин обладает токсическим действием на клетки нервной системы и может привести к повреждению головного мозга новорождённого. Гемолитическая болезнь новорождённых требует немедленного лечения.

У 1 из 10 тысяч младенцев выявляется атрезия желчевыводящих путей. Данная угрожающая жизни ребенка патология сопровождается повышением билирубина за счет прямой фракции и требует срочного хирургического вмешательства и в некоторых случаях трансплантации печени. У новорождённых также существует вероятность наличия гепатита с повышением как прямого, так и непрямого билирубина.

Изменения уровня фракций билирубина в крови с учетом клинической картины позволяют оценить возможные причины желтухи и определиться с дальнейшей тактикой обследования и лечения.

Для чего используется исследование?

• Для дифференциальной диагностики состояний, сопровождающихся желтушностью кожных покровов и склер.
• Для оценки степени гипербилирубинемии.
• Для дифференциальной диагностики желтух новорождённых и выявления риска развития билирубиновой энцефалопатии.
• Для диагностики гемолитической анемии.
• Для исследования функционального состояния печени.
• Для диагностики нарушений оттока желчи.
• Для наблюдения за пациентом, принимающим препараты с гепатотоксическими и/или гемолитическими свойствами.
• Для динамического наблюдения за пациентами с гемолитической анемией или патологией печени и желчевыводящих путей.

Когда назначается анализ?

• При клинических признаках патологии печени и желчевыводящих путей (желтуха, потемнение мочи, обесцвечивание стула, зуд кожных покровов, тяжесть и боли в правом подреберье).
• При обследовании новорождённых с выраженной и затянувшейся желтухой.
• При подозрении на гемолитическую анемию.
• При обследовании пациентов, регулярно употребляющих алкоголь.
• При использовании лекарственных препаратов с вероятным гепатотоксическим и/или гемолитическим побочным действием.
• При инфицировании вирусами гепатитов.
• При наличии хронических заболеваний печени (цирроз, гепатит, холецистит, желчнокаменная болезнь).
• При комплексном профилактическом обследовании пациента.

источник

Билирубин-витал-03 набор реагентов для определения концентрации общего и прямого билирубина в сыворотке крови методом маллой-эвелина

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО И ПРЯМОГО БИЛИРУБИНА

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ МЕТОДОМ МАЛЛОЙ-ЭВЕЛИНА

Кат. № В 03.03 – (250 мл +250 мл)

Общий билирубин определяется на основе реакции с диазотированной сульфаниловой кислотой, после диссоциации неконъюгированного (непрямого, свободного) билирубина под действием детергента. Для определения содержания конъюгированного (прямого, связанного) билирубина из реакционной смеси исключается детергент. Концентрация неконъюгированного билирубина рассчитывается по разнице концентрации между общим и конъюгированным билирубином.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ)

Свежая сыворотка крови без следов гемолиза

РЕАГЕНТ № 1 – РЕАГЕНТ НА ОБЩИЙ БИЛИРУБИН

Кислота сульфаниловая. ……….32 ммоль/л

РЕАГЕНТ № 2 – РЕАГЕНТ НА ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН

Сульфаниловая кислота………………………32 ммоль/л

РЕАГЕНТ № 3 – НАТРИЯ НИТРИТ

Линейность — отклонение не более 5 %

в диапазоне концентраций 5-340 мкмоль/л

Чувствительность — не более 5 мкмоль/л

Время проведения анализа: 5 мин

Срок годности набора – 12 мес

ВНИМАНИЕ! Тщательно закрывайте флаконы непосредственно после каждого использования реагентов.

Внести 2 мл бидистиллированной воды во флакон № 4.

Концентрация билирубина в растворе – 85,5 мкмоль/л.

Разведенный калибратор стабилен до 5 дней при температуре хранения 2-4°С.

Длина волны: 555 нм (530-580 нм)

Длина оптического пути: 1 см.

Температура инкубации: 18-25°С.

Для определения общего билирубина внести в пробирки:

Пробы перемешать и инкубировать 5 мин при 18-25°С.

Для определения прямого билирубина внести в пробирки:

Пробы перемешать и инкубировать точно 5 мин при

Фотометрировать опытные пробы против холостых проб.

Калибровочную пробу фотометрировать против контроля на реактивы (для этого из реакционной смеси исключить реагент № 4 — калибратор)

Расчет концентрации билирубина (С):

где: Аоп — адсорбция опытной пробы,

Акал-адсорбция калибровочной пробы,

85,5 мкмоль/л – концентрация билирубина в калибраторе.

Калибровочную пробу при измерении прямого билирубина ставить не нужно. Для расчета концентрации прямого билирубина использовать значение оптической плотности, полученное при постановке калибровочной пробы в реакции на общий билирубин.

Общий билирубин: 8,5-20,5 мкмоль/л.

Реагенты смешивать в указанном порядке; реакция начинается при добавлении сыворотки. При концентрации билирубина, превышающей 340 мкмоль/л сыворотку крови следует развести. При расчете концентрации учесть степень разведения. Реагент № 4 светочувствителен. И сухой и разведенный калибратор хранить в темноте!

Правильность проверена при помощи контрольных сывороток “Сontronorm” & “Contropath” (Biocon, Германия), “Precinorm U” & “Precipath U” (Roche Diagnostics, Швейцария), “Randox normal” & “Randox elevated” (Randox, Великобритания).

источник

Наборы для анализа субстратов на фотометрах

Производство биохимических наборов реагентов Витал

Тест-системы для биохимического анализа:

— широкий спектр выпускаемой продукции — 80 наборов реагентов для определения 45 биохимических показателей

— удобство использования и стабильность реагентов — выпуск жиждких и лиофилизированных форм

— диапазон измерений соответствует клинически значимой области концентраций

— срок годности наборов — от 12 до 24 месяцев

— наборы адаптированны к большинству автоматических (более 50 моделей) и полуавтоматических (более 25 моделей) анализаторов

источник