Билирубин в сыворотке крови методом

Билирубин и его фракции

Для исследования общего билирубина и его фракций применяются:

1. Прямые спектрофотометрические методы, основаны на измерении абсорбции билирубина при 440‑460 нм, источником ошибок здесь является интерференция желтых небилирубиновых пигментов;

2. Ферментативные методы, основаны на окислении пигмента медьсодержащим ферментом билирубиноксидазой (КФ 1.3.3.5.), с образованием биливердина и исчезновением абсорбции при 460 нм. Методы этой группы точны и отличаются высокой специфичностью и чувствительностью;

3. Колориметрические диазометоды , базируются на взаимодействии билирубина с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием азопигментов. Под воздействием кислоты разрывается тетрапирроловая структура билирубина с образованием двух дипирролов, углеродные атомы метиленовых групп вступают в прямую реакцию с диазотированной сульфоновой кислотой (диазосмесь) с образованием розово-фиолетовых изомеров азодипиррола с максимумом поглощения при 530 нм. Связанный билирубин реагирует быстро, несвязанный –– только после добавления акселератора (кофеин, метанол, мочевина, бензоат или гидроокись натрия, уксусная кислота и другие). Последний освобождает билирубин из комплекса с белками и тем самым ускоряет реакцию азосочетания. Образовавшийся азокраситель ведет себя как кислотно-основной индикатор с несколькими цветными переходами: в сильнокислой среде он окрашен в фиолетовый цвет, в слабощелочной и слабокислой — в розовый, в сильнощелочной среде — в синий или зеленый цвета.

4. Электрохимические методы с использованием платинового и ртутного электродов;

5. Хроматографическое разделение отдельных фракций билирубина;

6. Флюорометрические методы, используется свойство свободного билирубина после поглощения при 430 нм испускать свет длиной 520 нм. Позволяют определить концентрацию неконъюгированного билирубина и, после обработки детергентом, общего билирубина главным преимуществом метода является возможность использовать микроколичества сыворотки.

Унифицированным методом определения количества билирубина в сыворотке является метод Йендрашика‑Клеггорна‑Грофа по диазореакции в щелочной или слабокислой среде в присутствии акселератора.

Определение концентрации билирубина и его фракций
в сыворотке крови по диазореакции

Принцип

Билирубин взаимодействует с диазотированной сульфоновой кислотой в присутствии кофеина с образованием окрашенных азопигментов.

Нормальные величины

Клинико‑диагностическое значение

Сыворотка

Накопление билирубина в крови свыше 43 мкмоль/л ведет к связыванию его эластическими волокнами кожи и конъюктивы, что проявляется в виде желтухи. Для дифференциальной диагностики желтух необходимо определить, за счет какой фракции возникает билирубинемия:

1. Гемолитическая или надпеченочная желтуха — ускоренное образование билирубина в результате внутрисосудистого гемолиза. Это гемолитические анемии различного происхождения: отравление сульфаниламидами,талассемии, сепсис, лучевая болезнь, несовместимость крови, врожденный сфероцитоз, серповидно-клеточная анемия, дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы.

В данном случае гипербилирубинемия развивается за счет фракции непрямого билирубина. Гепатоциты усиленно переводят непрямой билирубин в связанную форму, секретируют его в желчь, в результате в кале увеличивается содержание стеркобилина, интенсивно его окрашивая. В моче резко возрастает содержание уробилина, билирубин отсутствует.

У новорожденных гемолитическая желтуха может развиться как симптом гемолитической болезни новорожденного.

2. Паренхиматозная (печеночно-клеточная) желтуха – причиной может быть нарушение на всех стадиях превращения билирубина в печени: извлечение билирубина из крови печеночными клетками, его конъюгирование и секреция в желчь. Наблюдается при вирусных и других формах гепатитов, циррозе и опухолях печени, жировой дистрофии, при отравлении токсическими гепатотропными веществами, при врожденных патологиях.

Так как в печени недостаточно проходят все реакции превращения билирубина, гипербилирубинемия развивается за счет обеих фракций, преимущественно фракции прямого билирубина. Количество непрямого билирубина возрастает за счет функциональной недостаточности гепатоцитов и/или снижения их количества, а прямого — за счет увеличения проницаемости мембран клеток печени, также из-за нарушения секреции в желчь.

В моче определяется билирубин (цвет крепкого черного чая), умеренно увеличена концентрация уробилина, уровень стеркобилина кала в норме или снижен.

3. Механическая или подпеченочная желтуха развивается вследствие нарушения оттока желчи при закупорке желчного протока – желчные камни, новообразования поджелудочной железы, гельминтозы. Также подпеченочные желтухи выявляются при новообразованиях поджелудочной железы и гельминтозах.

В результате застоя желчи происходит растяжение желчных капилляров, увеличивается проницаемость их стенок. Не имеющий оттока в желчь прямой билирубин поступает в кровь и развивается гипербилирубинемия за счет увеличения концентрации прямого билирубина. В моче резко увеличен уровень билирубина (цвет темного пива) и снижено количество уробилина, в кале практически отсутствует стеркобилин (серовато-белое окрашивание).

В тяжелых случаях, вследствие переполнения гепатоцитов прямым билирубином, конъюгация его с глюкуроновой кислотой может нарушаться и в крови будет увеличиваться количество несвязанного билирубина, т.е. присоединяется печеночно-клеточная желтуха.

Закупорка внепеченочных желчных путей является классической причиной билирубинурии. Показатель полезен в дифференциальной диагностике желтух, поскольку билирубинурия характерна для обтурационной и паренхиматозной желтух (повышение уровня связанного билирубина в сыворотке), но отсутствует при гемолитической. При гепатите билирубин может быть обнаружен в моче до появления желтухи.

Амниотическая жидкость

Билирубин содержится почти исключительно в неэтерифицированном виде в комплексе с альбумином и накапливается при эритробластозе, инфекционном гепатите и серповидноклеточном кризе у матери.

источник

Печень и анализы

Анализ на прямой билирубин в крови показывает количество пигмента, который образуется в результате распада гемоглобина, вызванного разрушением красных кровяных телец, именуемых эритроцитами. Эти элементы крови уже закончили свою миссию и преобразуются в печени.

Присутствие билирубина в организме в допустимом количестве считается нормальным явлением. Об опасности для здоровья человека свидетельствует отклонение от нормы, выявленное при проведении биохимического анализа крови. Оно указывает на многие патологические процессы и требует незамедлительного их устранения.

Что это значит — повышение или понижение прямого билирубина? Вот вопрос, волнующий пациентов, в анализе крови которых выявлены отклонения от нормы. Чтобы разобраться, следует выяснить причину изменений.

Что это за показатель

Билирубин представляет собой вещество желто-красного цвета, входящее в состав желчи. Не принимая участия в пищеварении, он способствует окрашиванию каловых масс и мочи и выводится из кишечника вместе с ними.

Как уже упоминалось, только отклонение от нормы свидетельствует о наличии проблем в организме. Поэтому говорить о билирубине как о вредном веществе нет оснований. К тому же, являясь своеобразным звоночком, предупреждающим об опасности, он, как предполагают, выступает еще в качестве активного антиоксиданта.

Разновидности вещества

Медицинская наука выделяет следующие виды билирубина:

1. Общий билирубин, в состав которого входят непрямой и прямой. Он является суммарным показателем уровня этого вещества.
2. Непрямой билирубин, или неконъюгированный (несвязанный). Его происхождение связано с утилизацией старых эритроцитов. Он представляет собой токсичное вещество, которое направляется с током крови в печень. В гепатоцитах печени при воздействии глюкуроновой кислоты преобразуется в прямой билирубин. В результате он приобретает растворимую форму, что дает возможность его выведения из организма.
3. Прямой, т. е. конъюгированный билирубин (связанный). Это нетоксичное вещество транспортируется клетками крови в желчные протоки, откуда попадает в 12-перстную кишку.

Таким образом, если общий билирубин представить как 100 % вещества в организме, то в его состав будет входить 75% непрямого токсичного и 25% прямого.

Превышение нормы билирубина в сыворотке крови носит название “билирубинурия”. Исключительно высокие показатели нетоксичного желчного пигмента в тканях указывают на гепатит и проявляются желтушностью склер и кожного покрова. Это гипербилирубинемия.

Допустимые нормы

Оптимальным считается состояние, при котором прямой билирубин присутствует в клетках печени, в желчном пузыре и 12-перстной кишке. Допускается проникновение небольшого его процента в кровь уже из кишечника.

Существенная разница наблюдается в показателях, характерных для взрослых людей и детей. Наглядно это видно из таблицы ниже.

У ребенка в первый месяц жизни (в мкмоль/л)

Показатели общего билирубина

Сразу после рождения (в 1 сутки) – от 50 до 60. В течение следующей недели – около 250.

Допустимое количество непрямого пигмента

До 15,5 (что составляет 75 % от общего показателя)

До 5,5 (соответственно – 25 % от суммарного показателя)

10 % от показателей общего билирубина

Показатели нормы можно представить более упрощенно:

• общий билирубин – от 5,5 до 22,1 мкмоль/л;
• прямой – от 0 до 5,2.

Характерной особенностью представительниц женского пола являются более низкие показатели: общий билирубин — 3,4–17,3; прямой не более 4,3 мкмоль/л.

Во время вынашивания ребенка

Билирубин в крови у женщины при беременности может быть повышен или понижен только из-за наличия хронических заболеваний или развития новых патологических процессов.

Вынашивание ребенка само по себе не сказывается на значении желчного пигмента. Однако возможно понижение его уровня на поздних сроках.

Незначительное повышение может возникнуть из-за сдавливания внутренних органов, которое становится причиной затрудненного оттока желчи.

Чем объясняются высокие показатели у детей первого года жизни

Что касается высокого уровня билирубина у новорожденных, то он вызван преобладанием в организме фетального гемоглобина, который очень быстро распадается и легко выводится.

Это явление называется физиологической желтухой, признаки проходят через несколько дней. Не исключена возможность проявления у младенца после родов гемолитической желтухи. Причина ее возникновения в следующем:

• резус-конфликт по группе крови у матери и малыша;
• хрупкие эритроциты, провоцирующие чрезмерность количества токсичного билирубина;
• инфекционный гепатит;
• аномалия развития желчного пузыря.

При наличии указанных патологий проводится обязательное лечение.

С какой целью делают анализ

Обследование пациента необходимо для выявления вероятности негативного воздействия высокого билирубина на печень.

При этом учитывается возможность повышения прямого билирубина вследствие нарушения оттока желчи из-за уже имеющихся препятствий для опорожнения желчного пузыря.

Своевременное выявление причины увеличения уровня этого вещества в крови дает возможность диагностировать то или иное заболевание и провести адекватный курс лечения.

Причины повышения

Одной из наиболее распространенных причин является гепатит. Он сопровождается отсутствием у клеток печени возможности осуществлять выведение пигмента в желчный пузырь.

Различные заболевания печени приводят к тому, что пигмент попадает в кровь в большом количестве. В этом случае возникает опасность вредного воздействия прямого билирубина на организм.

Например, если он повышен в 2 раза, это может стать причиной его кристаллизации, что провоцирует нарушение оттока желчи из пузыря. А это, в свою очередь, вызывает формирование конкрементов (камней) в этом органе и желчевыводящих путях.

Другие факторы

Причины, провоцирующие превышение нормы, разделяются на два вида: печеночные и внепеченочные. Из первых наиболее часто наблюдаются:

• гепатит типа А, В, С, а также хронический, бактериальный, токсический;
• холестаз;
• опухолевые процессы в печени;
• гипертиреоз у новорожденных.

Они возникают на фоне диффузных изменений в печени.

Причиной внепеченочного увеличения уровня прямого билирубина становится затруднение оттока желчи из пузыря, вызванное:

• сдавливанием органа (во время беременности);
• наличием послеоперационных рубцов;
• желчнокаменной болезнью;
• раком поджелудочной железы.

Нельзя исключать заболевания крови и селезенки.

Если уровень билирубина завышен, это свидетельствует о развивающихся патологиях, но не является диагнозом. Выявленные показатели становятся поводом для дальнейшего обследования.

О чем говорит пониженная концентрация

Значения ниже нормы наблюдаются редко. Они сигнализируют о таких заболеваниях, как:

1. Почечная недостаточность.
2. Анемия.
3. Лейкоз.
4. Туберкулез.
5. Ишемия сердца.

Как уже отмечалось, обнаруживается подобное на поздних сроках беременности. Кроме этого, возникает при неумеренном употреблении алкогольных напитков, крепкого кофе и некоторых медикаментов.

Симптомы

Проявления нарушений зависят от болезни-провокатора. При патологических процессах в печени возможны:

• горький привкус во рту;
• обесцвечивание кала;
• болезненные ощущения в правом подреберье;
• потемнение мочи;
• желтизна кожного покрова.

Нередко внезапно повышается температура до 38-39 °C.

О нарушениях в желчевыводящих путях говорят все перечисленные выше симптомы, а также желтушность тканей, диспепсические признаки, горькая отрыжка.

Диагностика

Определение уровня желчного пигмента предполагает в первую очередь проведение биохимического анализа крови. В связи с тем, что этот показатель не говорит о конкретном заболевании, проводится дальнейшее исследование для выявления причин, способных спровоцировать данные нарушения.

С этой целью по рекомендации врача пациент проходит следующие виды диагностирования:

По результатам обследования пациенту назначается курс лечения. Он зависит от того, какое заболевание печени или желчного пузыря было обнаружено.

Как привести билирубин в норму

Основой терапевтического лечения является комплексный подход к устранению данной проблемы. Он предусматривает использование лекарственных препаратов, обязательное соблюдение диеты и допускает использование народных средств.

Применение медикаментозных препаратов

Снизить концентрацию прямого билирубина помогают следующие группы лекарств:

1. Препараты, способствующие стабилизации выведения желчи (Одестон, Хофитол и Гепабене).
2. Гепатопротекторы – Гептрал и Эссенциале-Форте.
3. Ферменты, улучшающие пищеварение (Панзинорм, Креон и Фестал).

Не следует предпринимать попытки самостоятельного лечения. Это прямой путь к осложнениям и побочным эффектам от лекарств. Терапевтический курс и его длительность определяет врач.

О значении правильного питания

Чтобы понизить уровень билирубина, врач посоветует строго соблюдать диету. Этот метод снижения концентрации вещества предусматривает выполнение следующих правил:

1. Исключение из меню жирных, жареных, острых блюд.
2. Отказ от консервированных, маринованных и копченых продуктов.
3. Ограничение в употреблении кондитерских изделий.
4. Осторожность при выборе фруктов и ягод, нельзя кушать кислые сорта.
5. Под запретом крепкие бульоны, молочная продукция повышенной жирности, алкоголь и курение.

Предпочтение следует отдавать:

• овощам в вареном виде;
• овощным супам на втором бульоне;
• мясу курицы, кролика, индейки (его следует готовить на пару, запекать, тушить или отваривать);
• рыбным блюдам;
• различным кашам;
• обезжиренным молочным продуктам;
• запеканкам;
• компотам.

Важным фактором стабилизации билирубина является соблюдение питьевого режима.

Народные рецепты

Настоящим кладезем веществ, способствующих нормализации уровня желчного пигмента, являются многие лекарственные растения.

Для лечения годятся настои и отвары из мяты, ромашки, зверобоя и пустырника, а также лекарственного сбора, состоящего из листьев березы, шиповника и мелиссы.

Отвары готовятся следующим образом. Берут 1-2 ст. ложки ложки сырья, заливают кипятком (200 мл) и оставляют томиться на малом огне 15-20 минут. Затем их следует остудить, процедить и употреблять небольшими порциями в течение дня.

Настой приготовить еще проще: 1 ст. ложку травы залить крутым кипятком (1 стаканом) и настоять 10-15 минут. Способ применения аналогичен описанному выше.

Профилактика

Рекомендуется соблюдение норм правильного питания, ведение здорового образа жизни и наблюдение за концентрацией билирубина в крови, предполагающее сдачу крови для анализа 1 раз в год.

Обнаружение критических показателей уровня билирубина является сигналом о серьезных заболеваниях. Пытаться понизить концентрацию вещества в крови самостоятельно бесполезно.

Необходимо пройти тщательное обследование и правильный курс терапии, назначенный квалифицированным врачом.

Мы настоятельно рекомендуем не заниматься самолечением, лучше обратитесь к своему лечащему доктору. Все материалы на сайте носят ознакомительный характер!

источник

Определение общего билирубина в сыворотке крови

(метод Иендрашика и Клеггорна)

Принцип метода. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада гемоглобина эритроцитов в клетках ретикуло-эндотелиальной системы (печень,селезенка). Билирубин относится к группе желчных пигментов и является токсическим веществом; он обезвреживается в клетках печени. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме:

билирубин + УДФ-глюкуроновая кислота билирубин (моно- и диглюкуроид)

Глюкурониды билирубина хорошо растворимы, они выводятся из печени по желчевыводящим путям.

В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт) и растворимый (диглюкуронид ). Вместе обе формы составляют общий билирубин.

Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших количествах-0,5-1,2 мг/дл, причем 75% из них составляет билирубин, связанный с белками (нерастворимый).

При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, концентрация билирубина повышается до 30-35 мг/дл.

Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид реагирует с диазосмесью непосредственно.

Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.

Ход определения. Готовят две пробирки (контрольную и опытную). Составляют реакционную смесь по схеме:

Диазосмесь готовят (в количестве, достаточном для всей учебной группы), смешивая 10 мл 0,5%-ного раствора сульфаниловой кислоты и 0,3 мл 0,5%-ного раствора нитрата натрия.

Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перешивают, ставят на 20 минут в темноту, затем колориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром (длина волны 500-560 нм) против контроля.

Если в пробах развивается слабая окраска, то перед колориметрированием в обе пробирки добавляют по 3 капли 30%-ного раствора NaOH. При этом цвет раствора переходит в зеленый, а при большей концентрации билирубина в синий, часто наблюдается исчезновение мути. Пробы колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром. Расчет производят по калибровочному графику.

Калибровочный график для определения концентрации общего билирубина.

Оформление работы. В протокол вносят принцип метода, результаты колориметрии и расчет. Отмечают пределы колебаний концентрации билирубина в норме.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студентов недели бывают четные, нечетные и зачетные. 9824 — | 7641 — или читать все.

источник