Меню

Что такое фенотип лимфоцитов крови

Иммунофенотипирование лимфоцитов

Метод исследования, условия, необходимые для проведения

При исследовании определяется принадлежность клеток крови к тому или иному виду. Для проведения анализа требуется использование специального оборудования — цитофлюориметра. Также могут применяться микроскопы, при помощи которых фиксируют люминесцирующие метки и проводят их точный подсчёт. Оборудование должно давать возможность опознать каждую специальную метку в исследуемом материале.

Забор крови производят в вакуумную пробирку.

Кровь в пробирке обязательно перемешивают, медленно переворачивая ёмкость 10 раз. Транспортируют в лабораторию материал при температуре от 18 до 23 градусов, вертикально установив пробирку. Максимальный срок хранения взятого материала сутки. Само исследование занимает менее 5 часов.

Количественный состав каких клеток отражает результат анализа?

При исследовании интерес представляют несколько видов клеток. В бланке исследования будут зафиксированы полученные данные.

  1. Здоровые полноценные лимфоциты. Фиксируется абсолютное количество лимфоцитов, которые не деформированы, имеют правильное круглое ядро. Патологические изменения в них отсутствуют.
  2. Лимфоциты Т-клеточные. Ядро клеток формируется в вилочковой железе и тимусе. Клетки контролируют работу В-лимфоцитов, образующих ряд антител.
  3. Количество Т-хелперов. Одна из разновидностей T-лимфоцитов. Они обеспечивают правильный иммунный ответ организма при обнаружении чужеродного антигена. Данные клетки первого типа предупреждают развитие раковых клеток, а второго — действуют на агрессивные аллергены.
  4. Лимфоциты Т-цитотоксические. Они отвечают за уничтожение собственных клеток организма, если они поражены. Это свойство помогает противостоять опухолевым процессам, тяжёлыми бактериальными заболеваниями, когда возбудитель паразитирует внутри клетки.
  5. В-лимфоциты. Отвечают за выработку веществ, которые отвечают за правильность работы гуморального иммунитета.
  6. ЕК-клетки. Это естественные киллеры, действие которых избирательное и направленное на клетки с неопластическими изменениями.
  7. ЕКТ. Также природные киллеры, которые уничтожают патологические клетки, замаскированные под Т-лимфоциты.
  8. Иммунорегуляторный индекс. Он отражает соотношение Т-цитотоксических клеток и Т-хелперов.

Показания к исследованию

Исследование проводится по ряду показаний. В общую программу диспансеризации данный анализ не входит. Показания для проведения исследования следующие:

  • инфекционные патологии, если они затяжные или хронические;
  • сильные аллергии;
  • наличие симптомов иммунодефицита различной природы;
  • подозрения на рост опухолевых новообразований раковой или доброкачественной природы;
  • заболевания аутоиммунного характера;
  • тяжёлые плановые операции;
  • подготовка к пересадке внутренних органов;
  • длительный приём лекарственных препаратов, которые могут повлиять на лимфоциты.

О чем говорят повышенные и пониженные Т-лимфоциты

Отклонения показателя от нормы в большую сторону указывает на развитие воспаления иммунной природы. Чаще всего явление связано с лимфолейкозом, некоторыми вирусными и бактериальными заболеваниями, а также переходом патологии в хроническую форму. Отклонение в меньшую сторону указывает на иммунологический паралич. Такое явление обычно сопровождает период активного развития раковых опухолей. Также возможно присутствие поражений сердца.

Колебание числа В-лимфоцитов

Повышенный показатель указывает на наличие воспалений в острой или хронической формах. Заболевание может быть вызвано аллергическими, инфекционными или аутоиммунными процессами. При падении уровня компонента крови речь может идти о вирусной инфекции, раковом новообразовании или очаговом воспалении бактериальной природы.

Отклонения показателей естественных киллеров

Изменение показателя выше нормы указывает на тяжёлую, запущенную онкологию, сильные хронические воспаления или чрезмерное синтезирование антигенов против вирусов и бактерий. Понижение показателя возникает из-за высокого уровня Т-лимфоцитов и связано с состояниями, вызывающими его.

Показатели Т-цитотоксических лимфоцитов

Повышение показателя указывает на развитие опухолевого процесса. Также возможно тяжёлое вирусное заболевание в активной форме. Понижение показателя связано с состояниями, развивающимися по причине аутоиммунных нарушений.

Какие процессы определяются по уровню Т-хелперов

Высокие показатели указывают на воспаление в острой форме. Особенно высокие показатели отмечаются при аутоиммунных воспалениях. Снижение показателя связано с вторичным иммунодефицитом и иммунологическим параличом.

Отклонения значений по уровню Т-ЕК клеток

Увеличение показателя возможно по причине хронического воспаления, активной инфекции, присутствующей в организме длительное время, и воспалительных осложнений. Падение значения не имеет диагностической ценности.

источник

Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) — CD3, CD4, CD8, CD19, CD56

Исследование включает в себя определение абсолютных и относительных значений субпопуляционного состава лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD19, CD56). Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.

Иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии, субпопуляции лимфоцитов.

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
  • Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
  • Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
  • Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
  • Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
  • Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.
Читайте также:  Допустимый процент лимфоцитов в крови

Общая информация об исследовании

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека — основной компонент в оценке иммунного статуса — выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование — характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD антигены (англ. cluster of differentiation antigens) — это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов:

  • Т-лимфоциты (CD3 + CD19 — );
  • Т-хелперы/индукторы (CD3 + CD4 + CD45 + );
  • Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3 + CD8 + CD45 + );
  • истинные «натуральные киллеры» (NK-клетки) (CD3 — CD56 + CD45 + );
  • В-лимфоциты (CD19 + CD3 — );

— но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

  • Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток(Т-NK-клетки) (CD3 + CD56 + CD45 + );
  • NK-клетки, экспрессирующие α-цепь антигена CD8 (CD3 — СD8 + CD45 + ).

Когда назначается исследование?

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдромам.

  • частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
  • бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
  • урогенитальные инфекции;
  • грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
  • рецидивирующий герпес различной локализации;
  • гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
  • длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
  • генерализованные инфекции: сепсис, гнойные менингиты.

С аллергическим (атопическим) синдромом:

  • атопический дерматит;
  • нейродермит;
  • экзема с инфекционным компонентом;
  • тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.
  • ревматоидный артрит;
  • рассеянный склероз;
  • диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
  • аутоиммунный тиреоидит;
  • неспецифический язвенный колит.

С иммунопролиферативным синдромом:

  • опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).

Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов

Повышение показателя

Снижение показателя

  • Острые и хронические инфекции;
  • гормональный дисбаланс;
  • длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия);
  • прием биологически активных добавок;
  • интенсивные занятия спортом;
  • беременность;
  • Т-клеточные лейкозы.
  • Некоторые виды инфекций;
  • иммунодефицитные состояния;
  • алкогольный цирроз печени;
  • карцинома печени;
  • аутоиммунные заболевания;
  • прием иммуносупрессивных препаратов.
  • Ряд аутоиммунных заболеваний;
  • гормональный дисбаланс;
  • некоторые инфекции;
  • отдельные Т-клеточные лейкозы;
  • отравление солями бериллия.
  • Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита);
  • алкогольная болезнь печени;
  • аутоиммунные заболевания;
  • прием иммуносупрессивных препаратов или стероидов.

Т-цитотоксические лимфоциты (CD3 + CD8 + CD45 + )

  • Некоторые вирусные инфекции;
  • ряд Т-клеточных лейкозов;
  • наркоз;
  • острая фаза аллергии;
  • ряд аутоиммунных патологий.
  • Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний;
  • иммуносупрессивная терапия.
  • Ряд аутоиммунных патологий;
  • стресс;
  • В-клеточные лимфомы;
  • длительная экспозиция формальдегидом.
  • Гипореактивность, перераспределение в очаги воспаления;
  • общий вариабельный иммунодефицит;
  • наследственный иммунодефицит;
  • внутривенное введение иммуноглобулинов;
  • алкогольный цирроз печени.

(CD3 — CD56 + CD45 + ), (CD3 — CD16 + CD45 + )

  • Фаза восстановления после вирусных инфекций (гепатит В, С);
  • ряд аутоиммунных заболеваний;
  • онкологические заболевания;
  • беременность;
  • алкогольный цирроз печени.
  • Ряд инфекций;
  • ряд аутоиммунных заболеваний;
  • интенсивное курение;
  • иммуносупрессивная терапия и терапия стероидами.
  • Длительные хронические воспалитель­ные процессы;
  • тяжелое течение воспалительных процессов;
  • длительная персистенция антигена в организме.

Не имеет диагнос­тического значения.

Читайте также:  Норма показателя анализа крови лейкоцитов и лимфоцитов

В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.

  • Результаты данного исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов.
  • Следует отметить, что оценка показателей в динамике существенно повышает клиническую значимость исследования.

источник

Условия для иммунофенотипирования лимфоцитов для чего его проводят?

Одним из методов клинической диагностики является исследование крови способом иммунофенотипирования лимфоцитов. В его основе реакция между антителами и антигенами, которая используется для определения типов клеток крови, взятых из образцов биологического материала – крови, лимфатических узлов или костного мозга.

Анализ проводится с использованием специальных маркеров или меток, которые присоединяются к антигенам клеток. С помощью лабораторного оборудования отслеживают маркеры, производят подсчет клеток крови. Знание количества каждой из них позволяет квалифицировать опухолевые заболевания, подтвердить диагноз пациенту с определением конкретного его типа, например: достоверно установить вид лимфомы, лейкоза. Такая точная диагностика позволяет сделать выбор наиболее эффективной схемы лечения.

Метод исследования, условия, необходимые для проведения

Иммунофенотипирование – это исследование лимфоцитов, которое помогает увидеть клетки крови, распознать их принадлежность к определенному виду. Исследование проводят с использованием современного диагностического оборудования – цитофлюориметров или особых микроскопов, способных опознавать люминесцирующие составляющие, которые помогают различать разновидности люминесцирующих кровяных телец, вести точный их подсчет в каждой пробе. Оборудование позволяет опознать каждую из меток. Маркирование клеток это добавление в пробу антикоагулянта (реагент К2ЭДТА).

Забор образца для анализа производится из вены в области локтевого сустава. Для точного результата пациент должен соблюсти условия – проба берется натощак в утреннее время. В некоторых случаях допускается легкий прием пищи за 4 часа до процедуры, пациенту можно выпить небольшое количество обычной воды. Занятия спортом накануне диагностики или прием алкоголя запрещен, нарушение запрета приводит к искаженным результатам анализа. Повышенная психоэмоциональная нагрузка недопустима.

Для взятия крови специалист использует вакуумную пробирку. Ее применение позволяет достичь точного результата исследования, снизить болевые ощущения, точно произвести соотношение биологического материала и реагента.

После того, как образец поместили в пробирку, лаборант перемещает взятую пробу с антикоагулянтом, для этого требуется 10 раз медленно перевернуть емкость.

Для хранения и транспортировки материала для анализа требуется соблюдение условий: температурного режима при хранении образца от 18 до 23°С, сохранения положения пробирки вертикально. Срок ожидания результатов не превышает 24 часов от взятия пробы. Время проведения исследования 4 часа.

Количественный состав каких клеток отражает результат анализа?

В ходе проведения исследования специалисты клинической лаборатории отслеживают показатели в периферической крови пациента, возможные поражения. На бланк анализа заносят показатели:

  1. Абсолютное количество лимфоцитов, имеющих здоровое округлое ядро без патологий.
  2. Содержание Т-клеточных лимфоцитов – ядро этого вида кровяных телец образуется и созревает в тимусе или вилочковой железе. Обеспечивает иммунную реакцию организма в определенных условиях, осуществляет контроль над гуморальным ответом организма работой В-лимфоцитов, которые образовывают антитела. Обозначают ядро Т-клеточного лимфоцита как CD3+.
  3. Количественное значение Т-хеплеров (ядро обозначается CD3+CD4+) – разновидности Т-лимфоцитов, оптимальное количество которых в крови способствуют усилению иммунного ответа организма на поражение чужеродным антигеном, их 2 типа. Т-клеточный хелпер первого типа является «защитником» от опухолевых новообразований, вирусных агентов, участвует в защитных воспалительных реакциях. Второй Т-клеточный тип обеспечивает взаимосвязь с гуморальным иммунитетом, участвует в выработке иммуноглобулина Е – веществе, воздействующим на агрессивные аллергены внешней среды, смягчает поражение ими.
  4. Количество Т-цитотоксических лимфоцитов, ядро которых принято обозначать как CD3+CD8+. Такие лимфоциты распознают поражение клеток собственного организма и проводят их лизис или растворение. Таким способом организм борется с опухолевыми тканями, с поражением бактериями, которые паразитируют на клеточном уровне. Ядро Т-цитотоксического лимфоцита важный компонент иммунитета, направленного на уничтожение вирусов.
  5. В-лимфоциты, обозначаемые символами СD19+, вырабатывают активные вещества (антитела), действие которых направлено на поддержание гуморального иммунитета.
  6. Количество ЕК-клеток, их ядро обозначается как CD3-CD16+CD56+. Их называют естественными, или натуральными, киллерами. Такое название определяет их неиммунная цитологическая активность, которая направлена на клетки-мишени, имеющие неопластические изменения.
  7. Т-ЕК (ЕКТ) клетки, ядро которых имеет естественную киллерную активность, защищают от поражения клеток, имеющих качества и признаки Т-лимфоцитов.
  8. Иммунорегуляторный индекс, который показывает соотношение Т-хелперов и Т-цитотоксических клеток в крови, обозначается в анализе в виде соотношения CD3+CD4+/CD3+CD8+.

Когда назначают исследование?

Фенотипирование видов лимфоцитов назначают для диагностики ряда заболеваний. Иммунологи назначают исследование, если имеются основания заподозрить одни из них или при наличии «ярких» признаков других. Например: расшифровка количества лимфоцитов с определенным фенотипом понадобится при:

  • инфекционных заболеваниях, поражении хронического характера или если болезнь имеет затяжной характер,
  • аллергических реакциях организма,
  • проявлении устойчивых признаков и симптомов, указывающих на иммунодефицит врожденного или приобретенного свойства,
  • подозрении на опухолевые образования доброкачественной или злокачественной природы,
  • заболеваниях аутоиммунного типа, спровоцированных расстройством защитной системы, поражением собственного организма,
Читайте также:  Лейкоциты лимфоциты эозинофилы повышены в крови

Диагностика периферической крови требуется в других случаях. Ее назначат перед серьезным оперативным вмешательством, которое требуется больному в плановом порядке. При иммунофенотипировании врач узнает все процессы иммунного характера, происходящие у конкретного больного, что позволяет скорректировать защитные процессы, избежать клеточного поражения, и нормализовать их работу. Большое значение для врача имеют показатели различных видов кровяных телец, Т-клеточный состав крови в послеоперационный период, особенно в случаях с развитием патологических процессов.

Метод применяют и для оценки состояния человека, которому требуется трансплантация органов или проведена операция – анализ на иммунофенотипирование проведут на подготовительном этапе и во время послеоперационного восстановления, чтобы предупредить поражение и отторжение органа. Направление на анализ получают пациенты, лимфоциты которых могут изменить качественный и количественный состав из-за лечения заболеваний медикаментами определенных групп – иммуномодуляторами, иммунодепрессантами или цитостатиками.

Нормы и референсные значения содержания в крови частиц определенного вида зависят от возраста пациента. Врачи для оценки показателей используют специальные таблицы, в которых указаны оптимальные значения, пределы отклонений.

Какие проблемы отражают повышенные и пониженные Т-клеточные лимфоциты

Результат анализа покажет отклонение от нормы по количеству Т-клеточных лимфоцитов. Повышение их количества свидетельствует об иммунном воспалении, поражении или гиперактивности защитных процессов пациента. Такое превышение нормы вызывают заболевания – лимфолейкоз (острая и хроническая стадии), ряд вирусных и бактериальных инфекций в начале развития болезни. Увеличение Т-лимфоцитов возможно при изменении характера заболевания, переход его в хроническую форму.

Если у обследуемого абсолютное число Т-клеточных лимфоцитов снижено, говорят о развитии иммунологического паралича. Он сопровождает воспалительный процессы, может указывать на развитие злокачественных опухолевых новообразований. Такой показатель выявляется, если больная сердечная мышца – миокард, при некоторых сложных травмах, его снижение вызывает курение.

Колебание числа В-лимфоцитов

Увеличение числа В-лимфоцитов сигнализирует о поражении организма воспалительным процессом, развивающимся в острой или хронической стадии. Его природа аллергического, аутоиммунного или инфекционного характера. Эти лимфоциты увеличиваются из-за В-лимфолейкоза, бронхиальной астмы, муковисцидоза, больной печени и при хронических патологиях. Увеличенные показатели по В-лимфоцитам в анализе отражают восстановление после инфекций, перенесенных в острой и тяжелой форме.

Если число В-лимфоцитов не соответствует нижним пределам нормы, при проведении дополнительной диагностики врач подтвердит пациенту развитие опухолевых новообразований, острые вирусные инфекции или инфекции бактериального типа, развитие очагов воспаления в организме больного.

Отклонения показателей естественных киллеров

Повышенному уровню естественных киллеров способствуют патологические процессы, связанные с:

  • запуском онкологических процессов,
  • тяжелым течением воспалительного процесса, воспалительные заболевания в хронической стадии,
  • с избыточной выработкой антигенов, борющихся с бактериальным или вирусным процессом.

Содержание в клетках крови естественных киллеров может быть снижено из-за повышения уровня в крови Т-лимфоцитов и связано с процессами, вызывающими такое повышение.

Показатели Т-цитотоксических лимфоцитов

Если значение показателя CD8+ в превышающих норму цифрах, закономерно заподозрить опухолевое заболевание, вирусный процесс в активной стадии (при развитии вирусной, грибковой или внутриклеточной инфекции, заболеваний подобного типа).

Сниженные значения Т-цитотоксических лимфоцитов в результатах анализа предупреждают о процессах, развивающихся на фоне аутоиммунных болезней. Такой процесс подтверждает атаку аллергенов, развитие аллергии на момент обследования.

Какие процессы определяются по уровню Т-хелперов

Повышение содержание Т-хеплеров свидетельствует об остром воспалительном процессе в активной стадии. Иммунное воспаление отражает увеличение Т-хеплеров первого типа, рост показателя по второму типу определяет наличие воспалительного процесса аллергической природы. Обострение аутоиммунной патологии определяется, если Т-хеплеры обоих типов увеличены.

Снижение Т-хелперов происходит из-за состояния иммунологического паралича, выявляет иммунодефицит вторичного типа у больного.

Отклонения значений по уровню Т-ЕК клеток

Количество Т-ЕК клеток повышается, увеличиваясь по отношению к референсным значениям их содержания в крови по причине:

  • наличия хронических воспалительных процессов с длительным периодом воздействия на иммунную систему,
  • воспалительных процессов, сопровождаемых тяжелым протеканием, осложнениями при лечении,
  • сохранение инфекции в активном состоянии в клетках организма на протяжении значительного периода времени.

Сниженные лимфоциты такого вида не отображают значимые процессы, не являются важными для диагностики.

Использование метода иммунофенотипирования лимфоцитов позволяет проводить диагностику патологий, заподозрить развитие опасных, опухолевых болезней. Метод является безопасным для обследуемого, не требует значительных финансовых затрат.

источник