Днк фрагментация спермограмма расшифровка

Фрагментация ДНК спермограммы: описание анализа и его расшифровка

Фрагментация ДНК спермограммы — это специальное разрушение нуклеиновых цепей в ДНК. Цепочки располагаются в головной части сперматозоидов. В ситуациях, когда разрывы стремительно распространяются, постепенно нарушается целостность строения ДНК. Итогом такого явления, как фрагментация, является отсутствие какой-либо способности к зачатию ребенка.

Хорошая спермограмма — подтверждение отсутствия бесплодия у мужчины.

Как лечить фрагментацию

Фрагментация ДНК может быть устранена непосредственно самой яйцеклеткой. Это явление объясняется тем фактом, что яйцеклетка имеет способность к восстановлению ДНК у оплодотворившего ее сперматозоида. Но случаи восстановления ДНК единичны. Яйцеклетка может восстановить нуклеиновую цепочку у сперматозоида в зависимости от следующих факторов:

• процентного отношения поврежденного генетического материала;
• особенностей и характера повреждения ДНК;
• особенностей самой яйцеклетки (в данном факторе важное место занимает возраст женщины).

Необходимо помнить, что исследование на целостность ДНК может показать неидентичные результаты через определенный интервал времени. Такого рода исследование на ДНК необходимо обязательно пересдавать в целях уточнения поставленного или предполагаемого диагноза. Как правило, пересдача осуществляется через 2-4 недели.

Опасности для ДНК сперматозоидов

Существует определенное количество неблагоприятных факторов, воздействующих на структуру цепочек ДНК у сперматозоидов. Различают внешние и внутренние факторы.

Внутренними факторами негативного влияния на ДНК являются:

1. Неверный отбор сперматозоидов. Сами они образуются непосредственно в семенниках. С самого начала своего развития они могут нести отклонения в строении и в генетике. В организме мужчины существует специальная система отбраковки. Именно она отбраковывает патологические сперматозоиды. Однако в некоторых ситуациях такая система может и не сработать. Результатом является проникновение в эякулят сперматозоидов с различными повреждениями в генетической структуре.
2. Неполное дозревание. Дозревание сперматозоидов постепенно происходит в придатках яичек. С течением времени в ядрах сперматозоидов начинает активироваться хроматин. Если дозревание по каким-то причинам не произошло, то ДНК мужских половых клеток серьезно повреждается.

Внешними причинами патогенного воздействия на структуру ДНК являются:

1. Рентгеновское облучение или химиотерапия больного.
2. Варикоз больного, развившийся в семенных канатиках.
3. Повышение температуры тела у больного.
4. Наличие воспалительных процессов, носящих острый характер течения.
5. Влияние токсичных веществ.
6. Посттестикулярный стресс у больного.

Нужно понимать, что прохождение мужских половых клеток через эпидидимий может также привести к явлению дефрагментации ДНК.

Анализы на фрагментацию

Для того чтобы определить наличие у пациента такого явления, как фрагментация ДНК сперматозоидов, необходимо провести ряд анализов и обследований. На сегодняшний день существует несколько методик для выявления данной патологии генетического материала, а именно:

1. TUNEL-тест. Для его проведения необходимо, чтобы пациент поспешил сдать сперму, к которой добавляются специальные химические реагенты. Анализ пробы осуществляется микроскопически. Результат теста предоставляется человеку вместе со снимком сперматозоидов. В комплекте результатов имеется специальная анкета-выписка с указанием количества здоровых и пораженных сперматозоидов. Сдать данный анализ рекомендует лечащий врач. Кроме того, врач описывает сложившуюся ситуацию и дает письменное заключение, в листке которого должно быть указано, превышена ли норма присутствующих в сперме фрагментированных сперматозоидов.

Преимуществами данного теста являются следующие моменты:

• анализ показывает реальные и корректные показатели;
• высокий спектр прогнозирования;
• пороговая величина теста достигает более 15%;
• энзим, который добавляют к сперматозоидам, окрашивает фрагментированные клетки.

Показания к проведению TUNEL-теста:

• бесплодие без ясной этиологии явления;
• отрицательные попытки искусственного оплодотворения;
• частые выкидыши;
• варикоз семенных канатиков;
• возраст мужчины более 45 лет;
• после замораживания спермальной жидкости;
• сильное повышение температуры тела в течение 90 дней.

2. Спермограмма. Благодаря данному методу исследования можно достаточно быстро выяснить причину нарушения фертильности у мужчины. Спермограмма исследует разнообразные параметры семенной жидкости. Наиболее важными параметрами спермограммы являются:

• объем материала;
• pH материала;
• морфология семенной жидкости;
• подвижность сперматозоидов.

Спермограмма дополнительно представляет корректные сведения о следующих данных:

• число лейкоцитов (в норме менее 1 млн на мл);
• МАР-тест (должен быть менее 10%);
• временной промежуток разжижения семенной жидкости (нормой является период от 30 до 60 минут);
• запах (ощущение наподобие каштанового);
• оттенок образца спермы, которая должна быть беловатой (допускается присутствие слегка розового цвета).

Нормой значений результатов спермограммы по ВОЗ являются:

• объем спермы от 2 мл;
• pH в пределах 7,2-8,0;
• концентрация семенной жидкости равна 20 млн на мл;
• количество сперматозоидов более 4 млн;
• подвижность сперматозоидов более 50%;
• более 30% сперматозоидов должны иметь нормальную форму.

Таким образом выглядит правильная спермаграмма. В иных ситуациях по результатам проведенного исследования врач внимательно проводит описание семенной жидкости.

Где можно сделать спермограмму?

В настоящее время спермограмма делается исключительно в больничных условиях. Этим анализом занимаются как частные клиники и специализированные лаборатории, так и государственные больницы. Собирать сперму при этом можно дома или в больнице. При осуществлении такой процедуры необходимо выполнять следующие условия сбора и сдачи материала:

• не вести половую жизнь 4 дня перед проведением спермограммы;
• не употреблять алкогольные напитки за сутки до анализа;
• при сборе спермы на дому необходимо сдать ее как можно быстрее в больницу (разрешается в течение 1 часа);
• семенная жидкость собирается в стерильную баночку (в презерватив собирать запрещено).
• собрать семенную жидкость необходимо с помощью применения мастурбации.

Анализ проводится достаточно быстро с момента сдачи спермограммы. Все условия должны быть соблюдены, поскольку они напрямую влияют на результат.

Тест HALO как лучшая методика проведения фрагментации

Сущность данного теста заключается в исследовании хроматина сперматозоидов. Благодаря ему можно достаточно точно определить индекс фрагментации. Фрагментация ДНК может встречаться у 25% мужчин. Они годами могут лечиться от бесплодия и не подозревать при этом, что является настоящей причиной такого состояния. Фрагментация ДНК, определяемая тестом HALO, дает полное понимание сущности проблемы бесплодия мужчины. В тесте учитываются и изучаются исключительно сперматозоиды.

Для проведения анализа необходимо сдать сперму. Расшифровка результатов исследования может выглядеть следующим образом:

1. Фрагментация до 15% — беременность возможна. Лучшее процентное содержание сперматозоидов.
2. Фрагментация 15-25% — беременность возможна, но потребуется время или ЭКО.
3. Фрагментация более 30% — рекомендовано ЭКО.
4. Фрагментация более 50% — рекомендовано ИКСИ;
5. Фрагментация более 60% — рекомендовано ИКСИ или семенная жидкость донора.

Следует отметить, что стоимость такого анализа невысокая.

источник

Фрагментация ДНК сперматозоидов — что это за анализ? Показания, расшифровка Tunel-теста и прогнозы на беременность

Исследование фрагментации ДНК спермы – достаточно актуальная тема, если рассматривать проблему с точки зрения мужского бесплодия и бесплодных браков. В ряде случаев классической спермограммы бывает недостаточно (даже при ее хороших показателях), возникает необходимость в дополнительном ультраструктурном исследовании. Именно таким анализом является тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов. Делают анализ несколькими методиками, но наиболее часто используют исследование фрагментации ДНК в сперматозоидах методом Тунель (Tunel-тест).

Содержание

• Сперматогенез
• Что такое фрагментация ДНК сперматозоидов
• Причины
  • Предрасполагающие факторы
• На что влияет повреждение хроматина
• Тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов
  • Расшифровка
• Высокий индекс фрагментации и привычное невынашивание
• Как снизить фрагментацию ДНК спермы
  • Хирургическое лечение варикоцеле
  • Пероральные антиоксиданты
• Кому сдавать анализ «Спермограмма с фрагментацией ДНК в сперматозоидах»
• Суть исследования
• Подготовка к сдаче анализа

Что такое физиологическая фрагментация ДНК сперматозоидов в сперматогенезе

В организме человека сперматозоид – самая маленькая клетка. Для уменьшения его размера в процессе сперматогенеза (созревания спермия и превращения в зрелый сперматозоид) происходит специфическое преобразование. Ядро уплотняется за счет механизма конденсации хроматина. Большая часть цитоплазмы «выбрасывается» из мужской половой клетки в виде «цитоплазматической капли», остаются только необходимые органеллы.

У бесплодных мужчин индекс сперматозоидов с нарушением целостности хромосом более 30%. При фрагментации ДНК спермы больше 30% вероятность наступления беременности крайне низкая, а ранние потери беременности высокие (замирание, самопроизвольные аборты, внематочная беременность и т. д.).

Причины фрагментации ДНК

Выделяют 2 группы причин нарушенной целостности хромосом в мужских половых клетках:

1. Внутренние дефекты сперматогенеза (аномалии развития и генетические дефекты).
2. Внешние повреждения тестикул (опосредованное влияние гонадотоксинов, гипертермии, оксидативного стресса, эндокринных заболеваний).

Непосредственно в этих случаях влияют дефицит протаминов, активные формы кислорода, нарушение механизмов апоптоза, нарушения замены гистонов на протамины в сперматидах, плохая упаковка хроматина, усиление чувствительности к оксидативному стрессу дефектных сперматозоидов.

Факторы, приводящие к фрагментации ДНК сперматозоидов

К увеличению степени фрагментации ДНК приводят:

• лейкоспермия – повышенное количество лейкоцитов (воспалительные процессы, скрытые половые инфекции);
• возраст после 35 лет;
• привычки или стиль жизни: алкоголь, табакокурение;
• внешние факторы: пестициды в продуктах питания, работа на химическом производстве, повышенная температура на рабочем месте, влияние радиации;
• неопластические патологии: лейкемия, лимфома, рак яичек и химиотерапия;
• патологические процессы: повышение температуры тела, варикоцеле, генитальные инфекции, перекрут яичка, крипторхизм, слабый сперматогенез.
• генетические факторы: нарушения ДНК-репарации, антиоксидантные гены, путь детоксикации, аберрации и микроделеции.

На что влияет повреждение хроматина в мужских половых клетках

Повышенный процент фрагментации ДНК сперматозоидов:

• снижает фертильный репродуктивный потенциал мужчины;
• снижает частоту наступления беременностей;
• увеличивает репродуктивные потери при ЭКО и естественном оплодотворении, особенно на ранних сроках;
• снижает эффективность программ ВРТ (неудачное ЭКО и ВМИ).

Кроме того, измененная ДНК приводит к хромосомным нарушениям у детей, уменьшает срок жизни потомства, способствует развитию врожденных генетических дефектов у детей.

Анализ (тест) на фрагментацию ДНК сперматозоидов: оценка результатов и расшифровка Tunel-тест

Существует несколько методик для определения индекса фрагментации ДНК:

Наиболее прогностически значимым признано исследование фрагментации ДНК в сперматозоидах методом Tunel, но экономически более выгоден Halosperm. Наиболее часто тест проводится методами Tunel, Halosperm.

Расшифровка фрагментации ДНК в спермограмме представлена в таблице 1.

Таблица 1. Индекс фрагментации

Фрагментация ДНК сперматозоидов и привычное невынашивание беременности

Среди гинекологов-репродуктологов актуален вопрос привычного невынашивания. Одним из факторов прерывания беременности на сроке до 12 недель в 50% случаев выявляется мужской фактор. Чаще всего это пациенты с фрагментированной ДНК. Поэтому мужчинам рекомендуют делать спермограмму с тестом фрагментации ДНК.

Как снизить процент фрагментации ДНК спермы

Стратегия повышения мужской фертильности включает:

1. устранение варикоцеле;
2. здоровый образ жизни;
3. антиоксидантную терапию;
4. применение новейших достижений ВРТ;
5. лечение, направленное на снижение количества внеклеточной ДНК.

Хирургическое лечение варикоцеле

Если варикоцеле единственная причина бесплодия, то варикоцелеэктомия (удаление варикозно расширенных вен яичка) приводит к улучшению показателей спермограммы: увеличивается концентрация сперматозоидов и подвижность. Уменьшается фрагментация ДНК спермы, оксидативный стресс, улучшается морфология половых клеток. Повышается частота наступления спонтанной беременности и уменьшается количество случаев невынашивания в 1 триместре. У прооперированных мужчин с нормозооспермией (нормальными показателями спермограммы) и проведенной варикоцелеэктомией достоверно снижена частота повторного невынашивания беременности.

Нормализация образа жизни

Ожирение, алкоголь, курение, перегревание, радиация (Wi-Fi, мобильные телефоны, пестициды) – способствующие факторы. Необходимо лечение или сведение к минимуму их влияния. Что касается курения, перегревания, алкоголя – их нужно полностью исключить, чтобы уменьшить повреждение ДНК. Важно избавиться от избыточного веса (если он есть).

Препараты, которые используются для лечения сопутствующих заболеваний, также провоцируют повышение фрагментации. Среди них: циметидин, блокаторы Ca каналов, спиронолактон, статины, антибиотики, сульфаниламиды, альфа-блокаторы и другие. Поэтому пару, вступающую в протокол ЭКО, тщательно расспрашивают о применяемых препаратах и по возможности переводят на альтернативные лекарственные средства.

Лечение пероральными антиоксидантами

Для лечения повышенной фрагментации ДНК сперматозоидов используются препараты супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, витамины E, C, каратиноиды, убихинон, селен, цинк, L-карнитин, фолиева кислота, N-ацетилцистеин, коэнзим Q 10.

Употребление в пищу антиоксидантов повышает шансы не только на спонтанное зачатие, но и положительные исходы протоколов ВРТ.

Но единственным научно обоснованным препаратом, понижающим фрагментацию ДНК сперматозоидов, является докозагексаеновая кислота (ДКГ). Это незаменимая полиненасыщенная жирная кислота класса Омега-3, является одним из важных компонентов яичек, спермы, серого вещества мозга, сетчатки, клеточных мембран. Она обладает мощной антиоксидантной активностью и принимает участие в упаковке генетического материала. Эта кислота содержится в жире морских рыб (треска, лосось, сельдь, кит).

Эмпирическая антиоксидантная терапия подбирается индивидуально и назначается длительным курсом – 12 недель.

Кому нужно сдать тест на фрагментацию ДНК

Анализ на фрагментацию ДНК спермы не входит в стандарты обследования, как спермограмма или МАР-тест.

Tunel-тест может быть рекомендован при:

• идиопатическом бесплодии (когда причина неизвестна);
• после множественных неудачных попыток ЭКО;
• получении в протоколе ЭКО эмбрионов невысокого качества;
• привычном невынашивании и неоднократных выкидышах;
• варикоцеле;
• мужчинам после 45 лет;
• после размораживания криоконсервированной спермы (для крио ЭКО: необходимо убедиться, что процент клеток с поврежденной ДНК не превышает нормы);
• высокой температуре, наблюдаемой в последние 3 месяца.

Патофизиологические процессы, приводящие к повреждению ДНК, не до конца изучены. Определенная схема лечения бесплодия, вызванная этим фактором, пока не разработана. А методы репродуктивной медицины не всегда позволяют достичь положительного результата. Но нормализация структуры ДНК сперматозоидов позволяет улучшить качество эмбрионов и увеличить частоту клинических беременностей.

Суть метода Tunel

Для проведения теста сперму сдают как обычную спермограмму. Из образца биоматериала часть используется для светооптического исследования, где оцениваются морфологические качества сперматозоидов и состав спермы. Часть исследуется по методу Tunel.

В пробу для оценки фрагментации добавляют раствор меченных флюоресцирующих нуклеотидов, которые способны связываться с обрывками нитей ДНК. Нуклеотиды встраиваются в разорванную цепочку и выступают в качестве меток, которые флуоресцируют под микроскопом. Затем высчитывается процентное содержание «меченых» сперматозоидов и выдается результат.

Как подготовиться к исследованию

Перед сбором биоматериала действуют те же требования, как и перед сдачей спермограммы:

• Половое воздержание не менее 2 и не более 7 дней. Лучшее время – 3 суток. Если сдается анализ повторно, то лучше чтобы промежутки воздержания были одинаковыми.
• Отказ от алкоголя, курения, перегревания (сауны, бани и т.д.) сроком 3 месяца (весь процесс сперматогенеза длится в среднем 72 дня).
• Прекращение приема любых лекарственных препаратов, если врачом не указано обратное и нет угрозы жизни из-за прерывания терапии.
• Если мужчина перенес ОРВИ, грипп и другие заболевания с повышением температуры тела – сдачу анализа необходимо перенести.
• Накануне исключить физические и эмоциональные нагрузки.

Весь период подготовки необходимо правильное питание и соблюдение питьевого режима (1,5-2 литра в день).

Необходимо понимать, что качественные характеристики мужских половых клеток меняются во времени, в отличие от женских. Поэтому, точность результатов зависит от того, насколько вы серьезно подойдете к вопросу подготовки и лечению (для повторного теста на фрагментацию).

Актуальное видео

Фрагментация ДНК сперматозоидов

источник