Метод определения концентрации фибриногена

Содержание

Определение концентрации фибриногена

Определение концентрации фибриногена в клинической практике проводят для оценки системы гемостаза, острофазного ответа и риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Референтный диапазон его концентрации составляет 2,0-4,0 г/л и практически не зависит от пола и возраста, а при тяжелых бактериальных инфекциях, травмах его концентрация может превышать 10 г/л.

Для количественного определения концентрации фибриногена в условиях клинико-диагностических лабораторий наиболее применим метод Клаусса в основе которого лежит логарифмическая зависимость концентрации фибриногена в разведенной исследуемой плазме от lg времени образования сгустка после добавления к плазме тромбина высокой активности.

Перед регистрацией времени образования фибринового сгустка исследуемую плазму первоначально разводят буферным раствором в 10 раз, поскольку только в условиях высокой активности тромбина и низких концентраций фибриногена наблюдается линейная зависимость концентрации от времени образования фибрина. Такое разведение плазмы крови позволяет определять концентрацию фибриногена ориентировочно в диапазоне до 5,0 г/л. Этап разведения образца плазмы может отрицательно влиять на воспроизводимость метода.

Исключение этапа предварительного разведения пробы представляется целесообразным с позиции контроля качества исследований, и реализовано в модифицированном методе Клаусса используемого новой тест-системой «МультиТех-Фибриноген» производства фирмы « Технология –Стандарт». Модифицированный метод Клаусса позволяет исследовать концентрацию фибриногена в более широком диапазоне и исключить влияние этапа разведения пробы на правильность и воспроизводимость.

Метод может быть применен для определения концентрации фибриногена на коагулометрах с оптическим, оптико-механическим и механическим принципом регистрации образования сгустка.

Ниже приводятся результаты апробации и сравнения новой тест-системы с наборами реагентов для определения концентрации фибриногена других производителей.

Принцип метода заключается в определении времени свертывания цитратной плазмы избытком тромбина. Концентрация фибриногена определяется по калибровочной кривой, построенной в билогарифмической системе координат.

Подготовка реагентов к работе и проведение исследования приведены в инструкции к набору реагентов «МультиТех-Фибриноген».

Оценка результатов: Время свертывания исследуемого образца плазмы составляет 5-100 с, в зависимости от концентрации фибриногена и типа коагулометра. Диапазон определения концентрации фибриногена без дополнительного разведения составляет 0,9-10,0 г/л. Если результаты определения близки к 0,9 г/л или меньше (отсутствие регистрации сгустка), концентрацию фибриногена следует определить классическим методом Clauss набором реагентов «Тех-фибриноген-тест» (кат. № 094 или кат. № 324) или аналогичным с разведением плазмы 1:5. Концентрация фибриногена у здоровых людей находится в диапазоне от 2,0 до 4,0 г/л.

Результаты сравнительного тестирования набора реагентов «МультиТех-Фибриноген» с близкими по назначению наборами и различных коагулометрах

Калибровка тест-системы «МультиТех-Фибриноген» выполнена на коагулометрах с разным принципом регистрации времени образования сгустка с использованием набора «МультиТех-Калибратор», состоящего из 5 лиофилизированных образцов калибровочных плазм с концентрацией фибриногена 1.25, 2.2, 3.2, 5.5, 8.0 г/л. Калибровочные кривые, построенные для разных приборов, представлены на рис. Зависимость концентрации фибриногена от времени образования сгустка в билогарифмической системе координат приближается к прямой линии на всей области тестирования.

Рис. Калибровочные кривые, полученные при использовании набора «МультиТех-Фибриноген» на разных коагулометрах

Сравнение разных тест-систем проведено с использованием контрольной плазмы с концентрациями фибриногена 0,6; 1, 1; 2,3; 3,4; 5,6; 8,4 г/л . В таблице 1 приведены данные по стабильности определения КФ в плазме крови наборами реагентов разных фирм при проведении исследования по методу Клаусса с предварительным разведением плазмы 1:10, и использовании цельной плазмы, при проведении исследования по модифицированному методу.

ВАЖНО! Применение модифицированного метода Клаусса позволяет расширить диапазон уверенного определения КФ для разных типов коагулометров, особенно в области высоких концентраций, требующих дополнительного разведения пробы при классическом варианте метода.

Таблица 1.
Результаты определения КФ тест-системами разных производителей

источник

Метод определения концентрации фибриногена

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Технология Стандарт

Вид упаковки: картонная коробка

Набор для быстрого количественного определения концентрации фибриногена в плазме крови (хронометрический метод по Клауссу) на коагулометре любой конструкции. Линейность определения от 1,0 до 6,0 г/л (без дополнительных разведений плазмы). Набор рассчитан на выполнение 100-200 анализов при расходе тромбина по 0,1-0,05 на 1 определение содержания фибриногена. Принцип метода заключается в определении времени свертывания разбавленной цитратной плазмы избытком тромбина. Время свертывания при этом пропорционально концентрации фибриногена, которую определяют по калибровочному графику. Коэффициент вариации результатов определения концентрации фибриногена не превышает 5%. Допустимый разброс результатов определения концентрации фибриногена в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%

Тех-Фибриноген-тест предназначен для быстрого количественного определения содержания фибриногена в плазме крови (хронометрическим методом по Clauss) на коагулометрах всех имеющихся конструкций (как с оптическим, так и механическим принципом регистрации результатов) за исключением автоматов, которые требуют дополнительной настройки

Состав набора:
1. Тромбин (лиофильно высушенный реагент, 500 ед. NIH) — 2 флакона.
2. Растворитель для тромбина, 10,5 мл — 1 флакон.
3. Контрольная плазма с известным содержанием фибриногена (лиофильно высушенная) на 1 мл — 1 флакон.
4. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл — 1 флакон.
Линейность определения от 1,0 до 6,0 г/л (без дополнительных разведений плазмы).
Коэффициент вариации результатов определения концентрации фибриногена не превышает 5%.
Допустимый разброс результатов определения концентрации фибриногена в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%.
Все реагенты, входящие в набор, только для применения in vitro.
Хранение набора должно проводиться при температуре +2. 8°С в течение всего срока годности набора (24 месяца). Допускается транспортировка при температуре до +25°С в течение 30 суток, не замораживать.
Время использования набора не должно превышать 1 неделю с момента вскрытия его компонентов.
Раствор тромбина можно хранить при температуре +2. 8°С не более 3 дней; не замораживать.
Растворитель для тромбина после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2. 8°С не более 1 недели; не замораживать.
Контрольную плазму после разведения можно хранить при комнатной температуре не более 3 часов или не более 1 недели при температуре -16. -20°С.
Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре +2. 8°С не более 1 месяца.

Вся представленная на сайте информация, касающаяся технических характеристик, наличия на складе, стоимости товаров, носит ознакомительный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положением пунктом 2 статьи 437 Гражданского кодекса Российской Федерации. Всю подробную информацию о товарах, их наличии и стоимости Вы можете получить у менеджеров отдела клиентского сервиса.

На данном сайте используются файлы cookie (куки) в целях совершенствования работы сайта и получения аналитической информации. В случае несогласия, просим произвести соответствующие настройки в браузере или покинуть данный сайт. Оставаясь на www.art-medika.com, Вы принимаете нашу политику конфиденциальности. Заполняя форму заявки, Вы подтверждаете свое согласие на обработку персональных данных.

Таблица 1.
Результаты определения КФ тест-системами разных производителей

1 Определение концентрации фибриногена в клинико-диагностической лаборатории Бирюля Диана Геннадьевна ООО фирма «Технология-Стандарт»

2 Фибриноген гликопротеин плазмы крови синтезируется в печени в количестве 2-5 г в день, время его полувыведения около 4-х дней Функции: образование фибринового сгустка, заживление ран, фибринолиз, воспаление, ангиогенез, клеточное и структурное взаимодействие, неоплазия Референтные значения 2,0-4,0 г /л концентрация может увеличиться на % во время физиологического стресса

3 сложный гликопротеин, состоящий из трех пар полипептидов:α,β и ϒ полипептиды связаны друг с другом 29 дисульфидными связями

4 Клинико-диагностическое значение Гиперфибриногенемия повышение уровня фибриногена в крови. Является фактором повышенного риска развития артериальных тромбозов и инфарктов органов. Физиологическое: холодное время года, беременность, менструация, постменопауза Патологическое повышение: Реакции острой фазы (лихорадка, инфекционные болезни, воспалительные и некротические процессы; травмы, ожоги, хирургические операции). Злокачественные опухоли, метастазирование Курение Оральные контрацептивы

5 Клинико-диагностическое значение Гипофибриногенемия снижение концентрации уровня фибриногена в крови. Наследственный дефицит фибриногена (а- и дисфибриногенемия) ДВС-синдром (синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания) Гемодилюция кровезаменителями Декомпенсированные болезни печени (вирусные гепатиты, цирроз) Уменьшение содержание фибриногена плазмы до уровня ниже 1 г/л служит фактором риска появления кровотечений из сосудов внутренних органов

6 Историческая справка R. Wirchow в 1847 году предположил, что существует некий растворимый предшественник в плазме, из которого и формируется кровяной сгусток в 1859 году Deni de Commercy впервые предложил для этого предшественника термин «фибриноген» в 1876 году выделен Олафом Хаммарстен (Швеция) из плазмы лошадей В 1904 году А. Шмидт наряду с тромбином определил центральную роль F I в коагуляционном каскаде В 1909 году, фибриноген впервые был выделен в хорошо очищенном виде

7 Методы определения концентрации фибриногена в крови Нефункциональные методы: высаливания или тепловой преципитации фибриногена с последующим количественным исследованием коагулята (объемным методом, фотометрией) образование стабильного фибрина с последующим выделением и взвешиванием фотометрическое определение после растворения фибрина при помощи биуретового реактива иммунологический метод Функциональные методы определение по Клауссу с тромбином турбидиметрическая модификация c батроксобином

8 Данный этап практически невозможно сделать стандартным. Сильное отжимание сгустка — приводит к потерям фибрина Слабое отжимание — к ложному завышению уровня фибриногена Определение содержания весовым (гравиметрическим) методом по Рутберг Р.А. Принцип. Образовавшийся после свертывания плазмы крови фибрин быстро высушивается, и по весу определяют содержание фибриногена в плазме. Реактивы:1. Хлорид кальция, 5% раствор; 2. Эмульсия тканевого тромбопластина на трис-буфере, 0,05 М (или буфере Михаэлиса), рн 7,3-7,4 Материал для исследования: цитратная плазма. Ход определения: К 1,0 мл плазмы в пробирке последовательно добавляют 0,1 мл эмульсии тромбопластина (или раствор тромбина) и 0,1 мл 5% р-ра хлорида кальция. Реагенты перемешивают стеклянной палочкой. Палочку оставляют в пробирке. Смесь инкубируют в термостате с прозрачными стенками (ТПС) или на водяной бане (37 С) мин, после чего образовавшийся сгусток переносят на фильтровальную бумагу и высушивают путем сжатия и перемещения сгустка по бумаге. Сгусток фибрина взвешивают на торсионных весах. В норме масса сгустка фибрина составляет 9 18 мг. Расчет: для определения концентрации фибриногена, выраженной в г/л, массу фибрина в мг умножают на коэффициент 0,222. Фибриноген в г/л = мг фибрина 0,222 Норма в плазме: 2 4 г/л Сгусток может быть рыхлым вследствие наличия ингибиторов тромбообразования Большой объем используемой плазмы ограничивает использование в педиатрии Экономичен Данный этап практически невозможно стандартизировать! Сильное отжимание — приводит к потерям фибрина Слабое отжимание — к ложному завышению уровня фибриногена Максимальный контакт персонала с кровью

9 Иммунологические методы определения концентрации фибриногена и электрофрез иммуноферментный анализ (ELISA) радиальная иммунодиффузия иммунонефелометрии электрофорез Измерение концентрации белка, а не его функциональной активности Занимает много времени Ложные результаты при наличии ПДФ Использование моноклональных антител к разным антигенам фибриногена позволяет выявлять функциональные формы Рекомендован к использованию для оценки риска кардиоваскулярных заболеваний Fibrinogen antigen measurement is suitable for studies assessing fibrinogen as a risk factor for cardiovascular disease (Cremer et al, 1994; Sweetnam et al, 1996, 1998)

10 Определение концентрации фибриногена в протромбиновом тесте (PT derived Fibrinogen) Анализатор калибруется при исследовании протромбинового время плазмы (или серии разведений плазмы) с известной концентрацией фибриногена и построения графиков изменения оптической плотности по отношению к концентрации фибриногена в логарифмических шкалах Применение PT-Fg метода обеспечивает быстрое измерение фибриногена без каких-либо дополнительных затрат Метод применим только на автоматических анализаторах Результаты зависят от метода калибровки, типа анализатора и реагентов, и оптической прозрачности пробы Не рекомендован к применению у больных с ДВС, заболевания печени, заболевания почек, дисфибриногенемией, с высоким или низким уровнем фибриногена получавших антикоагулянты, тромболитической терапией Guidelines on fibrinogen assays British Journal of Haematology, 2003, 121, Корреляция с методом Clauss нелинейная (сигмовидная)

11 Метод Сlauss Clauss, A. (1957) Gerinnungsphysiologische schnellmethode zur bestimmung des fibrinogens. Acta Haematologica, 17, К плазме крови добавляют тромбин высокой активности и измеряют время образования сгустка. Расчет концентрации фибриногена проводят по калибровочной кривой построенной в логарифмических шкалах. Для исследования используют плазму крови разведенную буфером в 10 раз. Диапазон значений при стандартном разведении плазмы от 1 до 5 г/л Выполняется на коагулометрах с механическим и оптическим типом детекции образования сгустка Метод рекомендован для разных групп пациентов Построение калибровочных кривых позволяет адаптировать любой прибор к набору реагентов Дополнительные разведения образца необходимы если превышен диапазон линейности Малочувствителен к гепарину в терапевтических дозах и ПДФ Исследование может быть выполнено на коагулометре с любым вариантом регистрации образования сгустка

12 Классический метод Clauss ПЛАЗМА КРОВИ + БУФЕР ПЛАЗМА разведение 1:9 этап предварительного разведения плазмы ТРОМБИН Диапазон линейности метода от 1 до 5 г/л фибриногена Время образования сгустка от 4 сек иследование только на коагулометре

13 Модифицированный метод Clauss Нет этапа предварительного разведения плазмы ПЛАЗМА ТРОМБИН Диапазон линейности метода от 1 до 10 г/л фибриногена

14 Наборы реагентов модифицированного метода CLAUSS в России Барнаул

15 Калибровка 100 Время, сек 10 STart-4 CoaData KC 4D АПГ Концентрация фибриногена, г/л

Фибриноген – гликопротеид, растворимый предшественник нерастворимого фибрина.

Фибриноген синтезируется печенью в количестве 2-5 г в день, время его полувыведения из крови около 4-х дней.

Фибриноген относится к острофазным белкам, увеличивающийся в острой фазе воспаления. Повышение уровня фибриногена в острой фазе, как правило, имеет транзиторный характер в отличие от атеросклероза, при котором наблюдается устойчивое увеличение этого показателя, трудно поддающегося корреляции лекарственными препаратами.

Поскольку фибриногену принадлежит важная роль в системе свертывания крови, повышение его уровня при атеросклерозе принято рассматривать как один из патогенетических механизмов, обусловливающих повышенную свертываемость крови и нарушение регуляции тромбообразования, которое, в свою очередь, приводит к развитию инфаркта миокарда или инсульта.

Определение фибриногена в плазме крови часто используют не только при диагностике нарушений гемостаза, но и при распознавании и оценке тяжести воспалительных, иммунных и опухолевых процессах.

Гиперфибириногенемия – повышение уровня фибриногена в крови.

Является фактором повышенного риска развития артериальных тромбозов и инфарктов органов.

Физиологическое: беременность, менструация.

· Реакции острой фазы (лихорадка, инфекционные болезни, воспалительные и некротические процессы; травмы, ожоги, хирургические операции).

· Злокачественные опухоли (рак легкого)

· Болезни почек (острый и хронический пиелонефрит, гломерулонефрит; нефротический синдром)

Гипофибириногенемия – снижение концентрации уровня фибриногена в крови.

· Наследственный дефицит фибриногена (а- и гипофибриногенемия)

· ДВС-синдром (синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания)

· Состояние после кровотечения, травмы, ожога.

· Болезни печени (острая желтая атрофия печени, цирроз)

· Отравление гепатотропными ядами.

· Заболевания, сопровождающиеся поражением костного мозга (лейкозы)

· Лекарственные препараты (фенобарбитал)

Уменьшение содержание фибриногена плазмы до уровня ниже 1 г/л служит фактором риска появления кровотечений из сосудов внутренних органов.

Определение содержания фибриногена весовым (гравиметрическим) методом по Рутберг Р.А.

Принцип. Образовавшийся после свертывания плазмы крови фибрин быстро высушивается, и по весу определяют содержание фибриногена в плазме.

1. Хлорид кальция, 5% раствор;

2. Эмульсия тканевого тромбопластина на трис-буфере, 0,05 М (или буфере Михаэлиса), рН 7,3-7,4, для чего навеску сухого тромбопластина (50мг) тщательно растирают в 1,0 мл буфера. Постепенно объем смеси увеличивают добавлением буфера до 5,0 мл. Полученную эмульсию центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин, надосадочную жидкость отделяют и используют для анализа.. Эмульсия тромбопластина хранится при +2….+8 ° С в течение 3 суток.

Активность тромбопластина может быть в пределах 11 – 20 сек.

Материал для исследования: цитратная плазма.

К 1,0 мл плазмы в пробирке последовательно добавляют 0,1 мл эмульсии тромбопластина (или раствор тромбина) и 0,1 мл 5% р-ра хлорида кальция. Реагенты перемешивают стеклянной палочкой. Палочку оставляют в пробирке. Смесь инкубируют в термостате с прозрачными стенками (ТПС) или на водяной бане (37 ° С) 10 — 20 мин, после чего образовавшийся сгусток переносят на фильтровальную бумагу и высушивают путем сжатия и перемещения сгустка по бумаге. Такое высушивание продолжают до тех пор, пока на фильтре не перестанут определяться следы влаги в проходящем свете. Сгусток фибрина взвешивают на торсионных весах.

В норме масса сгустка фибрина составляет 9 – 18 мг.

Расчет : для определения концентрации фибриногена, выраженной в г/л, массу фибрина в мг умножают на коэффициент 0,222.

Фибриноген в г/л = мг фибрина ´ 0,222

Материалы публикуются для ознакомления, и не являются предписанием к лечению! Рекомендуем обратиться к врачу-гематологу в вашем лечебном учреждении!

Соавторы: Марковец Наталья Викторовна, врач-гематолог

Фибриноген — самый главный показатель свертываемости крови. Он синтезируется в печени и образуется в результате воздействия тромбина. Нормативное значение уровня фибриногена варьируется в пределах 2-4 грамм на литр крови. У беременных женщин и у новорожденных детей данный показатель несколько изменен. Любое отклонение от нормы свидетельствует о соответствующих патологических состояниях в организме.

Фибриногеном называют специфический белок плазмы крови, который синтезируется в печени. Он входит в группу анализов свертываемости. Этот белок необходим для нормального состояния гемостаза. Превращаясь в нерастворимый фибрин под воздействием тромбина, фибриноген образует некое образование (тромб), которое останавливает кровотечение, закрывая своими нитями поврежденную стенку сосуда.

Интересно! Если в составе плазмы крови фибриноген отсутствует, то она не свертывается. Такая плазма называется сывороткой.

У взрослого человека фибриноген находится на уровне 2-4 г/л. Норма фибриногена в крови у женщин в положении несколько увеличена −2-6 г/л, все зависит от срока беременности. У новорожденных данный показатель варьируется в пределах 1,3-3 г/л.

Узнать более подробно о норме фибриногена по неделям у беременных женщин можно в статье на нашем портале

В медицине фибриноген называют плазменным фактором гемостаза или свертывания, поэтому забор крови производят исключительно из вены. Пациентам назначают сдать кровь на коагулограмму (анализ свертываемости крови) или биохимию (биохимический анализ крови). Что это? Исследование производят в лаборатории. Венозную кровь помещают в специальную пробирку, где есть антикоагулянт. Спустя некоторое время скрининговые тесты гемостазиограммы специалисты лаборатории выдают лечащему врачу или пациенту. Чтобы расшифровать заключение лаборантов необходимо знать, какие компоненты в него входят:

Фибриноген
АЧТВ
Протромбин
Волчаночный антикоагулянт
Тромбиновое время
Тромбоциты
Протромбиновое время
Протромбиновый индекс
ДВС-синдром и др.

Кальций представляет собой один из наиболее важных внеклеточных элементов организма. У данного минерала имеется целый ряд физиологических функций, среди которых проведение нервных сигналов, обеспечение свертываемости крови. Кальций также необходим как строительный материал скелету и мышечной ткани сердца. Поэтому его отклонения от нормы могут свидетельствовать о развитии различных заболеваний.

Еще один способ определения фибриногена в крови — исследование по Клаусу. К разведенной плазме добавляют большое количество тромбина и следят за скоростью образования сгустка. Таким образом исследуют уровень фибриногена в плазме.

Чтобы результат анализов был правдивым, нужно соблюдать определенные правила:

не принимать медицинские препараты, влияющие на свертываемость крови;
за 6-8 часов до исследования ничего не есть и не пить;
исключить физические нагрузки;
нормализовать прием пищи.

Если в биохимическом анализе крови или коагулограмме указан повышенный фибриноген, это может свидетельствовать о наличии тех или иных патологических состояниях:

острые воспалительные процессы;
инфекционные заболевания;
рак;
полиорганная недостаточность функции внутренних органов;
нарушение функции щитовидной железы;
заболевания, связанные с некрозом тканей и клеток;
хирургическое вмешательство;
обезвоживание организма;
прием эстрогенсодержащих противозачаточных средств и др.

Факт! Повышенный фибриноген в ряде случаев определяется в крови у пациентов пожилого возраста и у людей с вредными привычками (курение, алкоголь).

Отклонения фибриногена от нормы в положительную сторону можно корректировать, принимая фибринолитики, антикоагулянты, антиагреганты, витаминные препараты с большим содержанием никотиновой кислоты, витамина А, С, Е и др. Пациенты с повышенным уровнем фибриногена должны исключить из повседневного рациона холестериновые продукты и пищу с высоким содержанием жиров животного происхождения. Чтобы понизить фибриноген, врачи рекомендуют принимать в пищу фрукты, овощи, горький шоколад, морепродукты, какао. Народные целители советуют пить сок алоэ, отвар корня пиона и свежий сок каланхоэ.

Анизоцитоз — отклонение размеров форменных элементов крови от нормы. Это симптом, дающий неспецифическую клиническую картину. Но он значим и достоверен как доказательство нарушений в системе гемопоэза и/или иммунитета, поэтому его обнаружение требует комплексного обследования пациента.

Важно! Самостоятельно расшифровывать анализ крови на фибриноген и назначать себе лечение не стоит. Это должен делать специалист лаборатории или лечащий врач.

Пониженный фибриноген зачастую указывает на несбалансированность питания или нехватку витаминов С и В12. Также отклонение от нормы в меньшую сторону может говорить о циррозе печени, ДВС-синдроме, интоксикации ядами, гепатите или токсикозе. Отклонения в отрицательную сторону корректируются приемом специальных медикаментов и употреблением в пищу некоторых продуктов: картофеля, гречка, шпинат, яйца, орехи, бананы и др.

Синонимы: Фибриноген, Fibrinogen.

Фибриноген или фактор I (первый) является компонентом коагулограммы, который демонстрирует свертывающую способность крови. После синтеза в печени фибриноген выбрасывается в кровоток вместе с аналогичными веществами, обеспечивая гемостаз всего организма. Благодаря фибриногену образуется тромб – кровяной сгусток, который закупоривает открытую рану, замедляя и останавливая кровотечение.

Анализ на фибриноген входит в программу пренатальной (дородовой) диагностики, назначается в процессе обследования сердечно-сосудистых, воспалительных и инфекционных заболеваний, а также в предоперационной подготовке больного.

Печень производит белок фибриноген, который трансформируется в нерастворимый фибрин. Именно он составляет базу для кровяного сгустка в процессе свертывания. Сгусток, в свою очередь, уплотняется и образует тромб – корочку, которая образуется на поверхности раны. Этот этап считается завершением процесса свертывания.

Уровень фибриногена в крови зависит от здоровья и функционирования печени. Также для его активизации необходим тромбин, который преобразует фибриноген в фибрин-мономер. Фактор свертывания XII трансформирует фибрин-мономер в фибрин-полимер, что позволяет закрепиться кровяному сгустку в зоне повреждения сосудистой стенки. Под воздействием фибринолизина фибрин-полимер расщепляется на мелкие фракции, которые всасываются организмом.

На заметку: недостаточное производство всех указанных компонентов или нарушение их связей может вызвать тромбоз (закупорку сосудов кровяным сгустком) или же кровотечение. Интересно, что плазма крови без соединений фибриногена полностью теряет способность к свертыванию и в медицинской практике называется «сыворотка».

Фибриноген относится к факторам «ревматической пробы», поэтому его концентрация резко повышается при острых воспалительных процессах, разрывах тканевых покровов, некрозах. Также высокий фибриноген может свидетельствовать об онкологических и аутоиммунных процессах, сердечно-сосудистых болезнях, патологическом протекании беременности. Он влияет на скорость оседания эритроцитов, что необходимо учитывать при проведении анализа на СОЭ.

У беременных фибриноген в норме начинает увеличиваться на последнем триместре и достигает пика к моменту родов (6 г/л при норме 4 г/л).

Уменьшение концентрации этого белка может говорить о сердечной недостаточности, заболеваниях крови и печени, развитии послеродовых осложнений.

Анализ на фибриноген используют для выявления способности организма к гемостазу и тромбообразованию. В качестве биоматериала выступает венозная кровь, взятая с утра на голодный желудок.

Исследование концентрации фибриногена (в рамках коагулограммы) назначается в следующих случаях:

в семейном анамнезе фиксируются нарушения свертываемости крови и связанные с этим генетические патологии;
заболевания сердца и сосудов;
острые инфекционные и воспалительные процессы;
болезни крови и нарушения системы кровообращения;
кровотечения неясной этиологии;
заболевания или функциональные расстройства печени;
диагностика состояний, обусловленных врожденным или приобретенным дефицитом фибриногена;
недавно полученные обширные ожоги или травмы;
контроль лечения тромболитиками, коагулянтами и антикоагулянтами;
плановое обследование перед хирургическим вмешательством;
скрининг-диагностика будущих мам каждый триместр беременности.

Расшифровку результатов анализа на фибриноген проводит врач-гинеколог, гематолог, терапевт, педиатр, хирург, ревматолог, кардиолог, анестезиолог и другие специалисты.

Для начала гемостаза (процесса свертывания) необходимо не менее 0,5 г/л

у небеременных пациентов норма 2-4 г/л*
у беременных женщин — 6-7 г/л.

*по данным независимой лаборатории Инвитро

Результат может быть недостоверным по следующим причинам:

Врожденные патологии, из-за которых не синтезируется достаточное количество фибриногена (гипо- и афибриногенемия);
Диеты, посты, голодания, в результате которых развивается мальабсорбция (нарушение всасывания питательных веществ);
Переливание крови;
Курение (повышает уровень фибриногена);
Стресс, психические и физические нагрузки (повышают);
Холецистит и сахарный диабет в анамнезе (повышают);
Ожирение (повышает).

Склонность к тромбообразованию;
Воспалительные, инфекционные или онкологические процессы:
- грипп в тяжелой форме;
- воспаление легких (пневмония);
- туберкулез;
- рак легких;
- мононуклеоз и др.;
Заболевания почек в острой и хронической форме:
- гломерулонефрит;
- пиелонефрит;
- почечная недостаточность и т.д.;
Патологии соединительной ткани:
- склеродермия;
- коллагенозы;
- ревматоидный артрит и пр.;
Лучевая болезнь (возникает вследствие воздействия на организм ионизирующего излучения);
Заболевания брюшной полости (перитонит);
Патологии сердца и головного мозга:
- инсульт;
- инфаркт миокарда;
- нарушение кровообращения в мозге;
Сосудистые заболевания:
- атеросклероз;
- тромбофлебит;
- венозная недостаточность;
- варикозное расширение вен;
- ангиопатия;
Амилоидоз (нарушение белкового обмена в организме);
Гипотиреоз (недостаточная секреция гормонов щитовидной железы).

Другие причины повышение фибриногена:

III триместр беременности, а также при ее осложнении, тяжелых родах;
массовые ожоги тела;
травмы, сопровождающиеся внутренним или внешним кровотечением;
прием гормональных препаратов: эстрогенов, оральных контрацептивов и т.д.

Токсикоз и гестоз у беременных;
Дисфункция печени, печеночная недостаточность в острой и хронической форме, другие болезни (цирроз, гепатит);
ДВС-синдром (нарушение свертывания из-за массового высвобождения тканевого тромбопластина);
Полицитемия (доброкачественные образования системы крови);
Миелолейкоз (рак стволовых клеток костного мозга);
Рак простаты на стадии появления метастаз;
Эмболия (закупорка сосудов) околоплодными водами, которая встречается у новорожденных;
Стремительные роды и другие осложнения в родах, кесарево сечение;
Бактериальный менингит (вызванный менингококком),
Афибриногенемия (наследственная патология, которая характеризуется отсутствием фибриногена в плазме), гипофибриногенемия (дефицит фибриногена).

Концентрация фибриногена снижается и в следующих случаях:

нехватка в организме аскорбиновой кислоты, витамина В12;
интоксикация змеиным ядом, отравление бледной поганкой;
прием лекарственных препаратов:
- гормоны (андрогены);
- анаболики;
- тромболитики;
- антибиотики;
- стероиды;
- барбитураты;
- вальпроевая кислота;
- антикоагулянты;
- ферменты (например, L-аспарагиназа);
- аспирин;
- препараты железа;
состояние после сильной кровопотери;
тромболизис (вид фармакологического лечения, в результате которого растворяется тромб).

В норме в 3-м триместре фибриноген повышается – это защищает организм будущей мамы от большой кровопотери, которая обычно случается во время родов.

1-й2,3 – 5,02-й2,4-5,13-й6,2 – 7,0

На фоне патологического сгущения крови в кровеносных и плацентарных сосудах могут сформироваться тромбы, в результате чего питательные вещества и кислород не будут поступать в достаточном количестве к плоду, что негативно отразится на его физическом и умственном развитии.

Резкое повышение фибриногена при беременности происходит при:

онкологических процессах;
недостаточности функции щитовидной железы;
некрозе тканей;
острых воспалительных, вирусных, инфекционных и бактериальных заболеваниях;
воспалении легких;
приеме гормональных препаратов на основе эстрогена.

И наоборот, если фибриноген снижается, то кровь разжижается, а это может привести к преждевременной отслойке плаценты и кровотечениям.

Уменьшение фибриногена у будущих мам возникает в следующих ситуациях:

заболевания печени (гепатит);
дефицит витаминов (аскорбиновой кислоты, витамина В12);
гестоз (поздний токсикоз).

Подробнее о показателях свертываемости крови

Важно! Все материалы носят справочный характер и ни в коей мере не являются альтернативой очной консультации специалиста.

Этот сайт использует cookie-файлы для идентификации посетителей сайта: Google analytics, Yandex metrika, Google Adsense. Если для вас это неприемлемо, пожалуйста, откройте эту страницу в анонимном режиме.

Инструкция по применению набора реагентов для определения протромбинового времени и концентрации фибриногена Квик-Фг-тест

ТОЛЬКО ДЛЯ IN VITRO ДИАГНОСТИКИ

по применению набора реагентов для определения

протромбинового времени и концентрации фибриногена

Набор Квик-Фг-тест предназначен для одновременного выполнения исследования системы гемостаза — протромбинового времени и концентрации фибриногена. Определение протромбинового времени используется для тестирования факторов свертывания II (протромбина), V, VII, X и контроля за лечением антикоагулянтами непрямого действия. Определение концентрации фибриногена используется для диагностики приобретенной недостаточности этого белка (ДВС-синдром, тяжелые заболевания печени, лечение фибринолитиками), а также врожденной а/гипо/дисфибриногенемии. Увеличение концентрации фибриногена наблюдается также при инфекционных заболеваниях, злокачественных новообразованиях, хронических воспалительных процессах, во время беременности.

Принцип метода. Тромбопластин (фактор III, тромбокиназа) превращает протромбин плазмы крови в присутствии ионов кальция в активный фермент тромбин, трансформирующий фибриноген плазмы крови в нерастворимый фибрин. Измеряется протромбиновое время — время образования фибрина в плазме крови в присутствии добавляемых ионов кальция и тканевого тромбопластина (экстракта из мозга человека). После быстрого обезвоживания сгустка (путем отжима на фильтровальной бумаге) измеряется масса образовавшегося фибрина, по которой расчитывается концентрация фибриногена в плазме.

1. Тромбопластин (лиофильно высушенный), 1 г — 2 фл. Реаген проверен на содержание вирусов гепатита и ВИЧ.

2. Хлорид кальция (концентрированный 20:1 раствор, 5,54%), 20 мл — 3 фл.

3. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл — 2 фл.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейность определения протромбинового времени — в диапазоне от 14 до 120 с, а для концентрации фибриногена от 1 до 8 г/л.

Коэффициент вариации результатов определения протромбинового времени не превышает 6%, а при определении концентрации фибриногена — 10%.

Допустимый разброс результатов определения протромбинового времени и концентрации фибриногена в одной пробе плазмы крови разными наборами одной серии не превышает 10%.

Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.

Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ

— термобаня на 37оС; весы торсионные;

— центрифуга лабораторная; секундомер;

— пипетки вместимостью 0,1 мл; 0,2 мл; 5,0 мл;

— пробирки стеклянные; цилиндр мерный вместимостью 200 мл;

— ступка фарфоровая с пестиком; вода дистиллированная;

— бумага фильтровальная; перчатки резиновые хирургические.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия), соотношение объемов крови и цитрата натрия — 9:1. Кровь центрифугируют при 3000-4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в другую пробирку, где хранят до проведения исследования.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование — сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плазмы, имеющей сгустки, гемолиз и полученной более 2 ч назад, а также замороженной плазмы крови.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К РАБОТЕ

А. Разведение концентрированного буфера

Содержимое одного флакона с концентрированным буфером трис-НСI перенести в мерный цилиндр и довести объем дистиллированной водой до 200 мл. В результате получают рабочий раствор буфера.

Б. Приготовление суспензии тромбопластина

Навеску сухого тромбопластина (50 мг) поместить в фарфоровую ступку, добавить 1,0 мл рабочего раствора буфера и тщательно растирать в течение 2 мин. Затем добавить в ступку 4,0 мл рабочего раствора буфера, перемешать с помощью пестика и взвесь центрифугировать при 1000 об/мин (240 g) в течение 5 минут. Надосадочную жидкость (суспензию тромбопластина) слить и использовать для анализа. Полученную суспензию тромбопластина можно использовать в течение 1 дня в условиях хранения при комнатной температуре (+18. +25оС) и в течение 2 дней при температуре +2. +8оС.

В. Для определения концентрации фибриногена использовать концентрированный (5,54%) раствор хлорида кальция.

Г. Приготовление рабочего раствора хлорида кальция (для определения протромбинового времени).

Для определения протромбинового времени в день исследования, в соответствии с потребностью, концентрированный раствор хлорида кальция развести дистиллированной водой в 20 раз (1 объем концентрированного раствора + 19 объемов воды), получают рабочий раствор хлорида кальция (0,277%).

2.1. Определение протромбинового времени по Квик (Quick)

Предварительно приготовить смесь из равных объемов 0,277% раствора хлорида кальция и суспензии тромбопластина. Смесь прогреть на водяной бане при температуре +37оС в течение 15-20 мин. В результате получают тромбопластин-кальциевую смесь (ТКС).

Определение контрольных (нормальных) показателей

1. В кювету коагулометра или в пробирку (при мануальном определении) внести 0,1 мл контрольной нормальной бедной тромбоцитами плазмы[1].

2. Инкубировать при температуре +37оС 1 мин.

3. Добавить 0,2 мл ТКС, имеющей температуру +37оС и начать отсчет времени свертывания до образования фибрина.

Аналогично определить протромбиновое время в образцах плазмы больных.

В нормальной плазме протромбиновое время составляет 14-17 с.

2.2. Определение концентрации фибриногена

1. В пробирке последовательно смешать 1,0 мл исследуемой плазмы крови, 0,1 мл суспензии тромбопластина и 0,1 мл концентрированного раствора (5,54%) хлорида кальция.

2. Пробирку встряхнуть и поместить на водяную баню при температуре +37оС.

3. Через 10 мин образовавшийся сгусток перенести на фильтровальную бумагу и высушить путем сжатия и перемещения сгустка по фильтру. Высушивание произвести до потери на фильтре следов влаги.

4. Сгусток фибрина выдержать на открытом воздухе при комнатной температуре (+18. +25оС) в течение 15-20 мин и взвесить на торсионных весах.

В норме масса сгустка, полученного из 1,0 мл плазмы крови, составляет 10-20 мг. Содержание фибриногена в г/л находят при умножении массы сухого фибрина на коэффициент 0,2.

В норме содержание фибриногена в плазме составляет 2,0-4,0 г/л.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Набор расчитан на одновременное проведение 400 анализов по определению протромбинового времени и концентрации фибриногена, при расходе реагентов по 0,1 мл на 1 анализ.

Хранение набора должно проводиться при температуре +2. +8оС в течение всего срока годности набора (18 мес.). Допускается хранение при температуре до +25оС в течение 10 сут. Замораживание не допускается.

Время использования набора не должно превышать 2 мес. с момента вскрытия его компонентов.

Лиофилизированный тромбопластин после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2. +8оС не более 1 мес.

Суспензию тромбопластина можно хранить при комнатной температуре (+18. +25оС) не более 1 дня или не более 2 дней при температуре +2. +8оС, не замораживать.

Тромбопластин-кальциевую смесь можно хранить при комнатной температуре не более 8 ч и при температуре +37оС — не более 3 ч.

Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре +2. +8 оС не более 1 мес.

Концентрированный раствор хлорида кальция можно хранить при температуре +2. +8 оС не более 2 мес при условии герметизации флакона.

Рабочий раствор хлорида кальция можно хранить при комнатной температуре не более 1 дня или не более 2 дней при температуре +2. +8оС.

[1] Может быть использована РНП-плазма фирмы «Технология-Стандарт».

Владельцы патента RU 2669796:

Изобретение относится к медицине и касается способа определения функционального фибриногена, включающего исследование цельной пробы крови путем тромбоэластографии. Гепаринизированную кровь и батроксобин вносят в кювету для тромбоэластографии, после чего выполняют тромбоэластографию, определяя параметр максимальной амплитуды (МА_{Батрокс}) на тромбоэластограмме, а концентрацию функционального фибриногена (ФФ_{Батрокс}) рассчитывают по формуле: ФФ_{Батрокс} = 0.1153 × МА_{батрокс} + 0.5903, где ФФ_{Батрокс} — концентрация функционального фибриногена (г/л), МА_{Батрокс} — максимальная амплитуда на тромбоэластограмме с гепаринизированной кровью и батроксобином (мм), 0.1153 и 0.5903 — коэффициенты пересчета. Изобретение обеспечивает повышение точности определения концентрации функционального фибриногена по максимальной амплитуде тромбоэластограммы гепаринизированной крови, в котором образование фибринового сгустка индуцируется добавлением батроксобина. 4 пр., 10 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к инструментальным способам оценки функционального состояния системы гемостаза, интенсивной терапии.

На сегодняшний день известны различные методы определения функционального фибриногена.

Так известно определение концентрации фибриногена по Клауссу, основанное на исследовании времени образования сгустка при добавлении высокой концентрации тромбина к разбавленной в 10-20 раз плазме. Тест выполняется на коагулометрах, при этом логарифм времени образования сгустка обратно пропорционален логарифму концентрации функционального фибриногена. Калибровочная кривая показывает укорочение времени свертывания при увеличении концентрации фибриногена. (Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. — М. — Тверь: ООО «Издательство «Триада» 2005. — 227 с,). Основными ограничениями метода определения фибриногена по Клауссу является чувствительность результатов к гипо-, дис- и гиперфибриногенемии, а также к продуктам деградации фибрина, которые влияют на процесс полимеризации фибрин-мономеров и могут быть причиной ложно низких результатов. Метод выполняется только в лабораторных условиях на специальном оборудовании (центрифуга, коагулометр).

Известно также определение функционального фибриногена (Functional Fibrinogen Level — FLEV)c помощью тромбоэластографии. Метод тромбоэластографии не требует центрифугирования крови, является прикроватным, широко используется в интенсивной терапии. Определение уровня функционального фибриногена с помощью тромбоэластографии заключается в регистрации максимальной амплитуды тромбоэластограммы после добавления к цитратной крови ингибитора тромбоцитарного гликопротеина IIb/IIIa (абциксимаба) и активатора вешнего пути свертывания (лиофилизированного тканевого фактора). Максимальная амплитуда (MA_FF), регистрируемая при этом на тромбоэластограмме, отражает уровень функционального фибриногена (FLEV) (Rossaint R, Bouillon В, Cerny V, Coats TJ, Duranteau J, E, et al. The European guideline on management of major bleeding and coagulopathy following trauma: fourth edition. Critical Care. Critical Care; 2016;20:100). Определенный таким образом функциональный фибриноген коррелирует с концентрацией фибриногена, определенной по Клауссу. В то же время известно, что функциональный фибриноген, определенный с помощью тромбоэластографии, может переоценивать концентрацию фибриногена (Agren A, Wikman AT, Ostlund A, Edgren G. TEG® functional fibrinogen analysis may overestimate fibrinogen levels. Anesthesia and analgesia. 2014;118:933-5). Возможной причиной переоценки фибриногена является то, что при этом методе не всегда удается полностью ингибировать тромбоциты, что было показано при сравнении его с методом тромбоэластометрии, использующим другой ингибитор тромбоцитов. Существенным недостатком является также дороговизна метода, ограничивающая его широкое использование, а возможное присутствие в пробе гепарина, который может получать обследуемый, требует выполнения теста с гепариназой.

Известен также способ определения функционального фибриногена в тесте FIBTEM ротационной тромбоэластометрии. В этом тесте к цитратной крови добавляются ингибитор тромбоцитов цитохалазин D, рекомбинантный тканевой фактор и ингибитор гепарина, после чего определяется максимальная плотность сгустка (показатель MCF — maximum clot firmness) по данным тромбоэластометрии. Функциональный фибриноген, определенный с помощью теста FIBTEM, коррелирует с концентрацией фибриногена по Клауссу (R 2 = 0.671, р 9 /л (норма 180-320×10 9 /л), плазменная концентрация фибриногена, определенная по методу Клаусса, составила 1,1 г/л.

Была выполнена тромбоэластография на тромбоэластографе TEG 5000 с реактивом Haemonetics® для исследования функционального фибриногена. В кювету для тромбоэластографии вносили 20 мкл 0,2М раствора кальция хлорида. Затем 500 мкл цитратной крови добавляли во флакон с реагентом на функциональный фибриноген (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000). После перемешивания из этого флакона отбирали 340 мкл крови и вносили в кювету, в которой уже находился раствор кальция хлорида. Выполняли тромбоэластографию. По окончанию теста определяли максимальную амплитуду стандартным методом определения функционального фибриногена (MA_FF), которая составила 34 мм, что соответствовало концентрации функционального фибриногена (FLEV) 6,3 г/л (фиг. 9). На фиг. 9 показана тромбоэластограмма с реактивом на функциональный фибриноген (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000) больной А с тромбоцитозом 1333×109/л. MAFF 34,4 мм, что соответствовало уровню функционального фибриногена (FLEV) 6,3 г/л. Одновременно выполняли тест с батроксобином активностью 5 МЕ/мл, полученным по описанному выше методу: 340 мкл гепаринизированной крови вносили в кювету, в которую было добавлены 10 мкл раствора батроксобина с активностью 5 МЕ/мл. Выполняли тромбоэластографию. Определяли максимальную амплитуду (МА_{Батрокс}) на тромбоэластограмме, которая составила 6,3 мм (фиг. 10), что, согласно полученной нами формуле, соответствовало концентрации функционального фибриногена (ФФ_{Батрокс}) 1,3 г/л, это оказалось значительно ближе к концентрации фибриногена, определенного по методу Клаусса, чем с реактивом Haemonetics®. На фиг 10 показана тромбоэластограмма с гепаринизированной кровью и батроксобином с активностью 5 МЕ/мл больной А. с тромбоцитозом 1333×109/л. МА_{Батрокс} 6,2 мм, расчетная концентрация функционального фибриногена (ФФ_{Батрокс}) 1,3 г/л. Большую величину MA_FF, чем МА_{Батрокс}, а, следовательно, и большую концентрацию функционального фибриногена можно объяснить различиями в методологических подходах. В тесте Haemonetics® максимальная амплитуда, которая должна бы соответствовать уровню фибриногена, достигается добавлением абциксимаба, ингибирующего тромбоциты, однако при тромбоцитозе, при котором количество тромбоцитов крови значительно превышает их нормальное значение, стандартная доза абциксимаба может не полностью ингибировать тромбоциты (Schlimp CJ., Solomon С, Ranucci М, Hochleitner G, Redl H, Ню The Effectiveness of Different Functional Fibrinogen Polymerization Assays in Eliminating Platelet Contribution to Clot Strength in Thromboelastometry. Anesth Analg 2014; 118: 269-76) и, следовательно, сохраняется их вклад в максимальную амплитуду тромбоэластограммы, поэтому ее величина будет завышенной. При определении функционального фибриногена в гепаринизированной крови в тесте с батроксобином активностью 5 МЕ/мл тромбоциты вообще не участвуют в формирования сгустка и максимальной амплитуды, следовательно, их количество в крови не влияет на определяемую концентрацию функционального фибриногена.

Таким образом, максимальная амплитуда тромбоэластограммы, выполненной с гепаринизированной кровью с добавлением батроксобином с активностью 5 МЕ/мл, хорошо коррелирует с плазменной концентрацией фибриногена, измеренной по методу Клауссса, с максимальной амплитудой тромбоэластограммы, выполненной с реактивом Haemonetics® для исследования функционального фибриногена (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000), отражает концентрацию функционального фибриногена у больных с гипофибриногенемией, нормальным содержанием фибриногена, при тромбоцитозе.

Способ определения функционального фибриногена, включающий исследование цельной пробы крови путем тромбоэластографии, отличающийся тем, что гепаринизированную кровь и батроксобин с активностью 5 МЕ/мл вносят в кювету для тромбоэластографии в соотношении 34:1 соответственно, после чего выполняют тромбоэластографию, определяя параметр максимальной амплитуды (МА_{Батрокс}) на тромбоэластограмме, а концентрацию функционального фибриногена (ФФ_{Батрокс}) рассчитывают по формуле: ФФ_{Батрокс} = 0.1153 × МА_{батрокс} + 0.5903, где ФФ_{Батрокс} — концентрация функционального фибриногена (г/л), МА_{Батрокс} — максимальная амплитуда на тромбоэластограмме с гепаринизированной кровью и батроксобином (мм), 0.1153 и 0.5903 — коэффициенты пересчета.

ФИБРИНОГЕН (фибрин + греч» gennao создавать, производить; син;I фактор свертывания крови) — белок, растворенный в плазме крови, превращающийся под воздействием тромбина в фибрин в процессе свертывания крови.

В плазме крови фибриноген содержится в концентрации от 2 до 4 г/л (в зависимости от применяемых методов определения). Молекулярный вес (масса) фибриногена значительно больше, чем у остальных белков плазмы и составляет примерно 340 000. Константа седиментации фибриногена (s20,w) равна 7,68. Длина молекулы фибриногена варьирует от 42 до 70 им в зависимости от количества связанной воды. При ионной силе нативной крови молекула фибриногена как целое довольно гибка и неустойчива. В нейтральной среде фибриноген имеет максимум поглощения в УФ-спектре при 280 нм, при увеличении pH до 11.0 появляются максимумы поглощения при 282 и 280 нм.

Фибриноген растворяется в разбавленных солевых растворах, выпадает в осадок при разведении плазмы крови и осаждается при увеличении ионной силы раствора, то есть. относится к фракции эуглобулинов (см. Глобулины). При постоянных значениях pH между 6.0 и 7,0 растворимость фибриногена повышается с увеличением ионной силы раствора. Нагревание до 50° вызывает быструю необратимую денатурацию и осаждение фибриногена из растворов. Содержание общего азота в фибриногене составляет около 17%, серы — 1,25%, фосфора — Нмкг/Ш) мг. Углеводная часть составляет 2,5 — 3% всей молекулы фибриногена, при этом от 0,7 до 1,3% приходится на долю гексоз, 0,55 —1,3% — гексозаминов и 0,54—0,7% — сиаловых кислот. Углеводная часть молекулы фибриногена связывается с белковой частью N-ацетил-D — глюкозаминал -(3-аспартиламидом через остаток аспарагина. В фибриногене обнаружены все известные аминокислоты, однако преобладают треонин, серин, триптофан, лизин, глицин, глутаминовая и аспарагиновая кислоты. Выявлены значительные видовые различия фибриногена по молекулярному весу, первичной структуре и СООН- и NН2-концевым остаткам.

Молекула фибриногена представляет собой димер, каждая субъединица которого состоит из трех типов полипептидных цепей, соединенных дисульфидными мостиками (SS-связями) в единую ковалентную структуру. Полипептидные цепи обозначаются Аа, В(3 и у и имеют молекулярный вес соответственно 67 000, 58 000, 47 000; а- и (3-цепи на ХН2-концах содержат фибрино-пептиды А и В, состоящие соответственно из 16 и 14 аминокислотных остатков и отщепляемые при действии тромбина (см.) на фибриноген. Первичная структура установлена для Аа- и у-цепей и одной трети (З-цеии. Между Bp — и у-цепями имеется выраженная гомология.

Отмечена значительная гетерогенность Асс-полипептидных цепей, как и молекул фибриногена в целом, вследствие воздействия па них тромбина и плаз мина (см. Фибринолизин) — основных ферментов гемостаза (см.) и фибр и ноли за (см.). В молекуле интактного фибриногена существуют конечные продукты протеолиза в виде крупных самостоятельных функционально важных блоков, называемых доменами. Известны основные домены — центральный (Е) с молекулярным весом 60 ООО и два периферических домена (D) с молекулярным весом около 95 ООО, имеется также домен аС. Три полипептидные цени начинаются в середине центрального домена. NH2-концы трех цепей одной субъединицы молекулы фибриногена составляют половину центрального домена Е. Эти цени, продолжаясь в периферическом направлении, образуют домен D, от которого отходит обширная СООН-концевая область Аа-цепи в виде домена аС.

Кроме плазмы крови и лимфы, фибриноген обнаружен в тромбоцитах. Различают внеклеточный фибриноген, адсорбированный на мембранах тромбоцитов, и внутриклеточный, связанный с сб-гранулами тромбоцитов (см.).

Содержание фибриногена в плазме крови здоровых лиц отличается довольно большим постоянством. В течение суток колебания содержания фибриногена в крови незначительны. При старении наблюдается повышение концентрации фибриногена в крови. Несмотря на высокий молекулярный вес фибриноген легко мигрирует во внесосудистое пространство и обнаруживается в лимфе, соединительной ткани и интерстициальном пространстве. При патологических процессах количество внесосудистого фибриногена может достигать 80% от общего его содержания в организме. Поддержание постоянного количества фибриногена в кровяном русле достигается в результате динамического равновесия между скоростью его синтеза, транскапиллярного обмена и расщепления или утилизации.

Синтез фибриногена осуществляется в рибосомах и микросомах геггатоцитов (клеток паренхимы печени). Фибриноген характеризуется высокой скоростью обмена; период полураспада у человека составляет в среднем около 3 дней. Ежедневно образуется от 1,5 до 5 г фибриногена. В течение суток печень может обновить до V3 циркулирующего в крови фибриногена. Синтез фибриногена усиливают адренокортикотропный гормон (см.), трийодтиронин (см.) и продукты расщепления фибриногена и фибрина (см.). В плазме крови содержится 75 ± 15% общего количества фибриногена в организме. Катаболизм фибриногена происходит в плазме крови, а также в клетках эндотелия сосудов и макрофагах; интактиый фибриноген клетки эндотелия не захватывают. Свою физиологическую функцию фибриноген способен выполнять лишь после превращения под влиянием тромбина в фибрин и последующей его спонтанной полимеризации. На нервом этапе тромбин, разрывая в Аа-цепях фибриногена связь между остатком аргинина в 17-м положении одной цепи и остатком глицина в 16-м положении другой цепи, отщепляет два фибриноиептида А, представляющие N-концевые участки по-липептидных цепей, на втором этапе тромбин расщепляет связь между остатком аргинина в 14-м положении и остатком глутамина в 15-м положении другой цепи в В (3-цепях и отщепляет два фибриноиептида В. Образующиеся после отщепления фибринопептидов фибрин-мономеры подвергаются полимеризации, а затем ковалентному связыванию под действием фибринстабилизирующего фактора (XIII фактора) свертывания крови. Фибриноген после превращения в фибрин участвует в остановке кровотечения из поврежденных сосудов и процессах репарации тканей, защищает от проникновения и распространения возбудителя инфекции при заживлении ран. Резкое снижение содержания фибриногена в крови может быть причиной кровоточивости.

Описано более 80 случаев врожденного дефицита фибриногена (см. Афибриногенемия). Кроме того, существуют наследственные и приобретенные дисфибриногенемии, связанные с изменением строения молекулы фибриногена в области ее углеводного компонента или белковой части (см. Геморрагические диатезы, табл.). Клинические проявления нарушения свертывания крови при этом часто отсутствуют, патология выявляется случайно. При некоторых наследственных аномалиях фибриногена, по данным 3. С. Баркагана (1983), наблюдается незначительная кровоточивость, при других — склонность к тромбозам (см.). Структура фибриногена в крови может быть изменена в результате активации фибринолиза или образования тромбина. Появляющиеся при действии плазмина продукты распада фибриногена, или фибрин-мономеры, возникающие иод влиянием тромбина, образуют с нативным фибриногеном растворимые комплексы (см. Паракоагуляция, т. 25, доп. материалы). На свойства фибриногена в крови оказывает влияние гепарин (см.). При активации противосвертывающей системы крови гепарин, поступающий в кровоток, образует с фибриногеном комплексы, обладающие высокой антитромбиновой, антинолимеразной и неферментативной фибринолитической активностью. Повышение содержания фибриногена в крови отмечено при различных заболеваниях: воспалительных процессах, заболеваниях почек, печени, ишемической болезни сердца, инфаркте миокарда и др. Изменение содержания фибриногена в плазме крови имеет часто дифференциально-диагностическое и прогностическое значение. По данным Пилгерема (L. О. Piigeram, 1968), скорость обмена фибриногена у больных ишемической болезнью сердца возрастает до 0,446 мг/мл в сутки, по сравнению с 0,387 мг/мл у здоровых лиц этого же возраста.

Существует более 100 методов определения концентрации фибриногена в крови, в том числе гравиметрические, объемный, нефелометрический, химический, электрофоретический, хронометрический, иммунохимический и тромбоэластографический. Большинство методов включает двухступенчатую процедуру: сначала осуществляют отделение фибриногена от других белков посредством превращения его в фибрин, затем — количественное определение фибриногена, при этом чаще всего используют колориметрический и нефелометрический методы (см. Колориметрия, Нефелометрия). Результаты определения фибриногена по тромбиновому времени (см. Тромбин) в норме коррелируют с данными иммунологического метода. При высоком содержании в крови продуктов расщепления фибриногена рекомендуется сульфитный метод определения фибриногена.

Препараты фибриногена получают из плазмы крови доноров методом спиртового фракционирования по Кону (I фракция). После лиофилизации фибриноген имеет вид пористой массы белого и кремоватого цвета. Форма выпуска: герметически укупоренные стеклянные флаконы емкостью 250 мл и 500 мл, содержащие соответственно 1 г и 2 г коагулируемого белка (фибриногена). Хранение при температуре от 2 до 10°.

Фибриноген применяют в качестве гемостатического средства при гиио- и афибриногенемиях, кровотечениях в травматологической, хирургической, онкологической практике, при массивных кровотечениях в акушерской практике. Применение фибриногена противопоказано при тромбозах различной этиологии, повышенной свертываемости крови, инфаркте миокарда, расстройствах микроциркуляции в органах при острой почечной недостаточности, гепаторенальнохм синдроме и др. Препараты фибриногена, меченного 1251, используют для диагностики тромбозов, поскольку он избирательно включается в тромбы. Внутривенно введенный фибриноген, меченный 1251, быстро удаляется. Измененный белок поглощается фагоцитами (см. Система мононуклеарных фагоцитов) и подвергается ферментативному расщеплению лизосомными гидролазами (см.).

Библиогр.: Андреенко Г. В. Дис-фибриногенемии, Лаборат. дело, № 8, с. 451, 1974; она же, Фибринолиз.(Биохимия, физиология, патология), с. 95, М., 1979; Андреенко Г. В. и Подорольская Л. В. Сульфитный метод определения концентрации фибриногена в крови, Лаборат. дело, № 3, с. 169, 1979; Б а р к а г а н 3. С. Гематогенные тромбофилии, Тер. арх., т. 55, № 8, с. 88, 1983; Б е л и ц e р В. А. Домены — крупные, функционально важные блоки молекул фибриногена и фибрина, в кн.: Биохимия животных и человека, под ред. М. Д. Курского, в. 6, с. 38, Киев, 1982; Зуба и ров Д. М. Биохимия свертывания крови, с. 7, М., 1978; Кудряшов Б. А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания, М., 1975; Машковс к и й М. Д. Лекарственные средства, ч. 2, с. 82, М., 1984. Г. В. Андреенко.

источник