Наборы для определения фибриногена

Определение концентрации фибриногена

Определение концентрации фибриногена в клинической практике проводят для оценки системы гемостаза, острофазного ответа и риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Референтный диапазон его концентрации составляет 2,0-4,0 г/л и практически не зависит от пола и возраста, а при тяжелых бактериальных инфекциях, травмах его концентрация может превышать 10 г/л.

Для количественного определения концентрации фибриногена в условиях клинико-диагностических лабораторий наиболее применим метод Клаусса в основе которого лежит логарифмическая зависимость концентрации фибриногена в разведенной исследуемой плазме от lg времени образования сгустка после добавления к плазме тромбина высокой активности.

Перед регистрацией времени образования фибринового сгустка исследуемую плазму первоначально разводят буферным раствором в 10 раз, поскольку только в условиях высокой активности тромбина и низких концентраций фибриногена наблюдается линейная зависимость концентрации от времени образования фибрина. Такое разведение плазмы крови позволяет определять концентрацию фибриногена ориентировочно в диапазоне до 5,0 г/л. Этап разведения образца плазмы может отрицательно влиять на воспроизводимость метода.

Исключение этапа предварительного разведения пробы представляется целесообразным с позиции контроля качества исследований, и реализовано в модифицированном методе Клаусса используемого новой тест-системой «МультиТех-Фибриноген» производства фирмы « Технология –Стандарт». Модифицированный метод Клаусса позволяет исследовать концентрацию фибриногена в более широком диапазоне и исключить влияние этапа разведения пробы на правильность и воспроизводимость.

Метод может быть применен для определения концентрации фибриногена на коагулометрах с оптическим, оптико-механическим и механическим принципом регистрации образования сгустка.

Ниже приводятся результаты апробации и сравнения новой тест-системы с наборами реагентов для определения концентрации фибриногена других производителей.

Принцип метода заключается в определении времени свертывания цитратной плазмы избытком тромбина. Концентрация фибриногена определяется по калибровочной кривой, построенной в билогарифмической системе координат.

Подготовка реагентов к работе и проведение исследования приведены в инструкции к набору реагентов «МультиТех-Фибриноген».

Оценка результатов: Время свертывания исследуемого образца плазмы составляет 5-100 с, в зависимости от концентрации фибриногена и типа коагулометра. Диапазон определения концентрации фибриногена без дополнительного разведения составляет 0,9-10,0 г/л. Если результаты определения близки к 0,9 г/л или меньше (отсутствие регистрации сгустка), концентрацию фибриногена следует определить классическим методом Clauss набором реагентов «Тех-фибриноген-тест» (кат. № 094 или кат. № 324) или аналогичным с разведением плазмы 1:5. Концентрация фибриногена у здоровых людей находится в диапазоне от 2,0 до 4,0 г/л.

Результаты сравнительного тестирования набора реагентов «МультиТех-Фибриноген» с близкими по назначению наборами и различных коагулометрах

Калибровка тест-системы «МультиТех-Фибриноген» выполнена на коагулометрах с разным принципом регистрации времени образования сгустка с использованием набора «МультиТех-Калибратор», состоящего из 5 лиофилизированных образцов калибровочных плазм с концентрацией фибриногена 1.25, 2.2, 3.2, 5.5, 8.0 г/л. Калибровочные кривые, построенные для разных приборов, представлены на рис. Зависимость концентрации фибриногена от времени образования сгустка в билогарифмической системе координат приближается к прямой линии на всей области тестирования.

Рис. Калибровочные кривые, полученные при использовании набора «МультиТех-Фибриноген» на разных коагулометрах

Сравнение разных тест-систем проведено с использованием контрольной плазмы с концентрациями фибриногена 0,6; 1, 1; 2,3; 3,4; 5,6; 8,4 г/л . В таблице 1 приведены данные по стабильности определения КФ в плазме крови наборами реагентов разных фирм при проведении исследования по методу Клаусса с предварительным разведением плазмы 1:10, и использовании цельной плазмы, при проведении исследования по модифицированному методу.

ВАЖНО! Применение модифицированного метода Клаусса позволяет расширить диапазон уверенного определения КФ для разных типов коагулометров, особенно в области высоких концентраций, требующих дополнительного разведения пробы при классическом варианте метода.

Таблица 1.
Результаты определения КФ тест-системами разных производителей

источник

Наборы для определения фибриногена

Реагенты ДДС работают практически на всех типах анализаторов независимо от метода детекции сгустка, включая такие модели как CoaLAB 1000, КоаТест-4, АСКа 2-01-«АСТРА», АПГ, Минилаб, Солар, КС-4 Delta, КС-1, Destiny Plus, Destiny Max, HumaClot Junior, HumaClot DUO, HumaClot Duo Plus, Ena, Tetra, Deca, Start-4, STart Мах, COAG-A-MATE XM, CoaDATA 4000, KG-4, Thrombostat, OPTION 2 PLUS (OPTION 4 PLUS), AK-37, Insula-500, Clot, Clot-1, Clot-1A, Clot SP, Clot 2B, Clotty, KG-500, TS4000 Plus, MAXMAT PL COAG, Autoclot, Clot 2S, CL Analyzer, COATRON M4, COATRON M1, COATRON M2, BC 1, BIOBAS, BIOBAS 1, BIOBAS 2, МС 1, МС 4 Plus, MC 10 Plus, MD 52, MD 54, MD-560, MD-560i, RT-2201C, RT-2202C, RT-2204C, Thrombotimer, CS-2000i/CS2100i, BCS XP System, ACL TOP 300 CTS, ACL TOP 500 CTS, ACL TOP 700 CTS, ACL TOP 700 LAS, ACL TOP 700, Coag4D D-Dimer, MG1410, Dixion С2000, СТ 2410, CA-50, CA-510, CA-560, CA-1500, СА-620, СА-650, СА-660, CGL2110, Thrombolyzer X, Thrombolyzer XR, Thrombolyzer XRM, Coasys Plus C, Ceveron-alpha, АнСО8-01-«ВАСМА», др.

При использовании наборов реагентов ДДС необходимо следовать заводским настройкам анализатора, изменив при необходимости объемы смешиваемых реагентов и плазмы, а также время инкубации, указанные в инструкциях к наборам ДДС.

Предоставляем адаптации по требованию.

Артикул

Наименование

Количество тестов

Протромбиновое время

Реагент для определения Протромбинового времени в плазме крови (ТРОМБОПЛАСТИН ДДС)

Тромбопластин, аттестованный по МИЧ – 5 флаконов (по 4 мл).

Реагент для определения Протромбинового времени в плазме крови (ТРОМБОПЛАСТИН ДДС)

Тромбопластин, аттестованный по МИЧ – 10 флаконов (по 4 мл).

Реагент для определения Протромбинового времени в плазме крови (ТРОМБОПЛАСТИН ДДС)

Тромбопластин, аттестованный по МИЧ – 10 флаконов (по 8 мл).

Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ)

Набор реагентов для определения Активированного частичного тромбопластинового времени в плазме крови (АЧТВ ДДС)

АЧТВ-реагент – 5 флаконов (по 4,0 мл).
Раствор хлорида кальция, 0,025 M – 5 флаконов (по 4,0 мл)

Набор реагентов для определения Активированного частичного тромбопластинового времени в плазме крови (АЧТВ ДДС)

АЧТВ-реагент – 5 флаконов (по 10,0 мл).
Раствор хлорида кальция, 0,025 M – 5 флаконов (по 10,0 мл)

Тромбиновое время

Набор реагентов для определения Тромбинового времени в плазме крови (ТРОМБИН ДДС)

Тромбин – 10 флаконов (по 2 мл).

Набор реагентов для определения Тромбинового времени в плазме крови (ТРОМБИН ДДС)

Тромбин – 10 флаконов (по 4 мл).

Фибриноген

Набор реагентов для определения содержания фибриногена в плазме крови (ФИБРИНОГЕН ДДС)

Тромбин для определения фибриногена – 5 флаконов (по 2,0 мл).
Имидазоловая буферная система (ИБС), рН 7,45-7,55, содержащая имидазол, 0,05 М; натрий хлористый, 0,15 М — 1 флакон (25 мл).
Референсная плазма – 1 флакон (1,0 мл).

Набор реагентов для определения содержания фибриногена в плазме крови (ФИБРИНОГЕН ДДС)

Тромбин для определения фибриногена – 5 флаконов (по 4,0 мл).
Имидазоловая буферная система (ИБС), рН 7,45-7,55, содержащая имидазол, 0,05 М; натрий хлористый, 0,15 М — 2 флакона (по 25 мл).
Референсная плазма – 1 флакон (1,0 мл).

Для анализаторов «КоаТест-4»

Артикул

Наименование

Количество тестов

Протромбиновое время

Реагент для определения Протромбинового времени в плазме крови (ТРОМБОПЛАСТИН ДДС)

Тромбопластин, аттестованный по МИЧ – 5 флаконов (по 4 мл).
Карта идентификационная

Реагент для определения Протромбинового времени в плазме крови (ТРОМБОПЛАСТИН ДДС)

Тромбопластин, аттестованный по МИЧ – 10 флаконов (по 4 мл).
Карта идентификационная

Реагент для определения Протромбинового времени в плазме крови (ТРОМБОПЛАСТИН ДДС)

Тромбопластин, аттестованный по МИЧ – 10 флаконов (по 8 мл).
Карта идентификационная

Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ)

Набор реагентов для определения Активированного частичного тромбопластинового времени в плазме крови (АЧТВ ДДС)

АЧТВ-реагент – 5 флаконов (по 4,0 мл).
Раствор хлорида кальция, 0,025 M – 5 флаконов (по 4,0 мл)
Карта идентификационная

Набор реагентов для определения Активированного частичного тромбопластинового времени в плазме крови (АЧТВ ДДС)

АЧТВ-реагент – 5 флаконов (по 10,0 мл).
Раствор хлорида кальция, 0,025 M – 5 флаконов (по 10,0 мл)
Карта идентификационная

Тромбиновое время

Набор реагентов для определения Тромбинового времени в плазме крови (ТРОМБИН ДДС)

Тромбин – 10 флаконов (по 2 мл).
Карта идентификационная

Набор реагентов для определения Тромбинового времени в плазме крови (ТРОМБИН ДДС)

Тромбин – 10 флаконов (по 4 мл).
Карта идентификационная

Фибриноген

Набор реагентов для определения содержания фибриногена в плазме крови (ФИБРИНОГЕН ДДС)

Тромбин для определения фибриногена – 5 флаконов (по 2,0 мл).
Имидазоловая буферная система (ИБС), рН 7,45-7,55, содержащая имидазол, 0,05 М; натрий хлористый, 0,15 М — 1 флакон (25 мл).
Референсная плазма – 1 флакон (1,0 мл).
Карта идентификационная

Набор реагентов для определения содержания фибриногена в плазме крови (ФИБРИНОГЕН ДДС)

Тромбин для определения фибриногена – 5 флаконов (по 4,0 мл).
Имидазоловая буферная система (ИБС), рН 7,45-7,55, содержащая имидазол, 0,05 М; натрий хлористый, 0,15 М — 2 флакона (по 25 мл).
Референсная плазма – 1 флакон (1,0 мл).
Карта идентификационная

источник

Инструкция по применению набора реагентов для определения протромбинового времени и концентрации фибриногена Квик-Фг-тест

ТОЛЬКО ДЛЯ IN VITRO ДИАГНОСТИКИ

по применению набора реагентов для определения

протромбинового времени и концентрации фибриногена

Набор Квик-Фг-тест предназначен для одновременного выполнения исследования сис­те­мы гемостаза — протромбинового времени и концентрации фиб­риногена. Определение протромбинового времени исполь­зуется для тестирования факторов свертывания II (прот­ром­би­на), V, VII, X и контроля за лечением антикоагу­лян­тами не­прямого действия. Опреде­ление концентрации фибриногена используется для диаг­ностики приобре­тенной недос­та­точности этого белка (ДВС-синдром, тяжелые заболевания печени, ле­чение фибриноли­ти­ка­ми), а также врожденной а/гипо/дисфибриногенемии. Увеличение концентрации фибри­ногена наблюдается также при инфек­цион­ных заболе­ва­ниях, злока­чест­венных новообра­зо­ва­ниях, хронических воспа­лительных процессах, во время беременности.

Принцип метода. Тромбопластин (фактор III, тромбокиназа) превра­щает прот­ромбин плазмы крови в присутствии ионов кальция в активный фермент тромбин, трансфор­ми­рую­­щий фибриноген плазмы крови в нерас­творимый фибрин. Измеряется протромбиновое время — время образования фибрина в плазме крови в присутствии добавляемых ионов кальция и тка­невого тромбопластина (экстракта из мозга человека). После быст­рого обез­во­живания сгустка (путем отжи­ма на фильтровальной бумаге) измеряется масса образовав­шего­ся фибрина, по ко­то­­­рой расчитывается концентрация фибриногена в плазме.

1. Тромбопластин (лиофильно высушенный), 1 г — 2 фл. Реаген проверен на содержание вирусов гепатита и ВИЧ.

2. Хлорид кальция (концентрированный 20:1 раствор, 5,54%), 20 мл — 3 фл.

3. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл — 2 фл.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейность определения протромбинового времени — в диапазоне от 14 до 120 с, а для концентрации фибриногена от 1 до 8 г/л.

Коэффициент вариации результатов определения протромбинового времени не пре­вы­­шает 6%, а при определении концентрации фибриногена — 10%.

Допустимый разброс результатов определения протромбинового времени и концентра­ции фибриногена в одной пробе плазмы крови разными наборами одной серии не превы­шает 10%.

Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.

Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер­чат­­ки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро­ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепати­та В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ

— термобаня на 37оС; весы торсионные;

— центрифуга лабораторная; секундомер;

— пипетки вместимостью 0,1 мл; 0,2 мл; 5,0 мл;

— пробирки стеклянные; цилиндр мерный вместимостью 200 мл;

— ступка фарфоровая с пестиком; вода дистиллированная;

— бумага фильтровальная; перчатки резиновые хирургические.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силикониро­ван­ную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата нат­рия), соотношение объемов крови и цитрата натрия — 9:1. Кровь цент­ри­фу­ги­руют при 3000-4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. В результате получают бедную тром­бо­цитами плазму, которую переносят в другую пробир­ку, где хранят до проведения иссле­до­вания.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование — сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плаз­мы, имеющей сгустки, гемолиз и полученной более 2 ч назад, а также замороженной плаз­мы крови.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К РАБОТЕ

А. Разведение концентрированного буфера

Содержимое одного флакона с концентрированным буфером трис-НСI перенести в мер­ный цилиндр и довести объем дистиллированной водой до 200 мл. В результате полу­чают рабочий раствор буфера.

Б. Приготовление суспензии тромбопластина

Навеску сухого тромбопластина (50 мг) поместить в фарфоровую ступку, добавить 1,0 мл рабочего раствора буфера и тщательно растирать в течение 2 мин. Затем добавить в ступку 4,0 мл рабочего раствора буфера, перемешать с помощью пестика и взвесь центрифуги­ровать при 1000 об/мин (240 g) в течение 5 минут. Надосадочную жидкость (сус­пен­­зию тром­боплас­тина) слить и использовать для анализа. Полученную суспензию тром­боп­лас­тина мож­но ис­пользовать в течение 1 дня в условиях хранения при комнатной тем­пе­ратуре (+18. +25оС) и в течение 2 дней при температуре +2. +8оС.

В. Для определения концентрации фибриногена использовать концентрированный (5,54%) раствор хлорида кальция.

Г. Приготовление рабочего раствора хлорида кальция (для определения протромбинового времени).

Для определения протромбинового времени в день исследования, в соот­ветствии с пот­ребностью, концентрированный раствор хлорида кальция развести дистиллированной водой в 20 раз (1 объем концентрированного раствора + 19 объемов воды), получают рабочий раст­вор хлорида кальция (0,277%).

2.1. Определение протромбинового времени по Квик (Quick)

Предварительно приготовить смесь из равных объемов 0,277% раствора хлорида кальция и суспензии тромбопластина. Смесь прогреть на водяной бане при температуре +37оС в течение 15-20 мин. В результате получают тромбопластин-кальциевую смесь (ТКС).

Определение контрольных (нормальных) показателей

1. В кювету коагулометра или в пробирку (при мануальном определении) внести 0,1 мл контрольной нормальной бедной тромбоцитами плазмы[1].

2. Инкубировать при температуре +37оС 1 мин.

3. Добавить 0,2 мл ТКС, имеющей темпе­ра­туру +37оС и начать отсчет времени свер­ты­ва­ния до образования фибрина.

Аналогично определить протромбиновое время в образцах плазмы больных.

В нормальной плазме протромбиновое время составляет 14-17 с.

2.2. Определение концентрации фибриногена

1. В пробирке последовательно смешать 1,0 мл исследуемой плазмы крови, 0,1 мл сус­пензии тромбопластина и 0,1 мл концентрированного раствора (5,54%) хлорида кальция.

2. Пробирку встряхнуть и поместить на водяную баню при температуре +37оС.

3. Через 10 мин образовавшийся сгусток перенести на фильтровальную бумагу и высу­шить путем сжатия и перемещения сгустка по фильтру. Высушивание произвести до потери на фильтре следов влаги.

4. Сгусток фибрина выдержать на открытом воздухе при комнатной температуре (+18. +25оС) в течение 15-20 мин и взвесить на торсионных весах.

В норме масса сгустка, полученного из 1,0 мл плазмы крови, составляет 10-20 мг. Содер­жа­­­­ние фибриногена в г/л находят при умножении массы сухого фибрина на коэффициент 0,2.

В норме содержание фибриногена в плазме составляет 2,0-4,0 г/л.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Набор расчитан на одновременное проведение 400 анализов по определению прот­ром­­би­нового времени и концентрации фибриногена, при расходе реагентов по 0,1 мл на 1 анализ.

Хранение набора должно проводиться при температуре +2. +8оС в течение всего срока годности набора (18 мес.). Допускается хранение при температуре до +25оС в течение 10 сут. Замораживание не допускается.

Время использования набора не должно превышать 2 мес. с момента вскрытия его ком­по­нентов.

Лиофилизированный тромбопластин после вскрытия флакона можно хранить при тем­пературе +2. +8оС не более 1 мес.

Суспензию тромбопластина можно хранить при комнатной температуре (+18. +25оС) не более 1 дня или не более 2 дней при температуре +2. +8оС, не за­мо­раживать.

Тромбопластин-кальциевую смесь можно хранить при комнатной темпе­ратуре не более 8 ч и при температуре +37оС — не более 3 ч.

Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре +2. +8 оС не более 1 мес.

Концентрированный раствор хлорида кальция можно хранить при температуре +2. +8 оС не более 2 мес при условии герметизации флакона.

Рабочий раствор хлорида кальция можно хранить при комнатной температуре не более 1 дня или не более 2 дней при температуре +2. +8оС.

[1] Может быть использована РНП-плазма фирмы «Технология-Стандарт».

источник

7 Фибриноген

Фибриноген – белок, вырабатываемый в печени и превращающийся в нерастворимый фибрин – основу сгустка при свертывании крови.

Подробное описание анализа в Базе медицинских знаний Хеликс

* Цена указана без учёта стоимости взятия биоматериала. Услуги по взятию биоматериала добавляются в предварительный заказ автоматически. При единовременном заказе нескольких услуг услуга по сбору биоматериала оплачивается только один раз.

источник