Определение билирубина в лабораторной диагностике

Определение общего билирубина в сыворотке крови

(метод Иендрашика и Клеггорна)

Принцип метода. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада гемоглобина эритроцитов в клетках ретикуло-эндотелиальной системы (печень,селезенка). Билирубин относится к группе желчных пигментов и является токсическим веществом; он обезвреживается в клетках печени. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме:

билирубин + УДФ-глюкуроновая кислота билирубин (моно- и диглюкуроид)

Глюкурониды билирубина хорошо растворимы, они выводятся из печени по желчевыводящим путям.

В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт) и растворимый (диглюкуронид ). Вместе обе формы составляют общий билирубин.

Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших количествах-0,5-1,2 мг/дл, причем 75% из них составляет билирубин, связанный с белками (нерастворимый).

При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, концентрация билирубина повышается до 30-35 мг/дл.

Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид реагирует с диазосмесью непосредственно.

Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.

Ход определения. Готовят две пробирки (контрольную и опытную). Составляют реакционную смесь по схеме:

Диазосмесь готовят (в количестве, достаточном для всей учебной группы), смешивая 10 мл 0,5%-ного раствора сульфаниловой кислоты и 0,3 мл 0,5%-ного раствора нитрата натрия.

Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перешивают, ставят на 20 минут в темноту, затем колориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром (длина волны 500-560 нм) против контроля.

Если в пробах развивается слабая окраска, то перед колориметрированием в обе пробирки добавляют по 3 капли 30%-ного раствора NaOH. При этом цвет раствора переходит в зеленый, а при большей концентрации билирубина в синий, часто наблюдается исчезновение мути. Пробы колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром. Расчет производят по калибровочному графику.

Калибровочный график для определения концентрации общего билирубина.

Оформление работы. В протокол вносят принцип метода, результаты колориметрии и расчет. Отмечают пределы колебаний концентрации билирубина в норме.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Что представляет собой анализ на уровень общего билирубина?

Содержание

Под таким медицинским термином, как общий билирубин необходимо понимать желтый гемохромный пигмент, который является продуктом распада гемоглобина, цитохромов и миоглобина в клетках печени, ретикулоэндотелиальной системы и селезенки.

Билирубин представляет собой один из главных компонентов желчи.

Данный компонент содержится в сыворотке крови под видом фракций. Прямой (связанный или конъюгированный и непрямой (свободный или несвязанный), которые вместе составляют общий билирубин в крови.

Это важно! С помощью методов лабораторной диагностики наиболее часто используют определение билирубина общего и прямого билирубина.

Общая информация об исследовании

С помощью анализа крови «общий билирубин» можно получить сведения о работе печени. Определение уровня билирубина входит в комплекс обязательных диагностических процедур для выявления многих заболеваний ЖКТ.

В большинстве случаев изменение уровня билирубина в крови является признаком серьезных патологий.

Принято различать следующие типы нарушений обмена билирубина, которые приводят к его накоплению в крови.

Повышенный гемолиз эритроцитов (следствие заболеваний, при которых происходит распад эритроцитов крови и выделение гемоглобина в окружающую среду, например, сфероцитоз, серповидно-клеточная, пернициозная /сидеробластная анемия, гемолитическая болезнь новорожденных (процессы иммунной агрессии в отношении нормальных эритроцитов).

Необходимо обратить особое внимание на тот факт, что распад эритроцитов может повышаться вследствие токсического влияния на клетки крови определенных химических веществ. Повышение распада эритроцитов приводит к ферментативному расщеплению большого объема гемоглобина в ретикулоэндотелиальной системе, в результате чего в кровь выделяется дополнительное количество непрямого билирубина.

Нарушение анатомической или функциональной целостности клеток печени- результат вирусных гепатитов, острых и хронических воздействий токсических веществ: алкоголь, лекарственные препараты, химикаты, которые применяются в промышленности и быту. Такие нарушения приводят к повышенной проницаемости внешней оболочки клеток печени или полному их разрушению. В результате чего происходит выброс содержимого в системный кровоток, поскольку именно в клетках печени содержится большое количество билирубина развивается гипербилирубинемия.

Наличие препятствий для свободного оттока желчи из желчевыводящих путей в кишечник. Данные нарушения являются результатом сдавливания желчных путей на фоне тканевых деформаций вследствие опухолевых процессов, увеличенных лимфоузлов, рубцовых изменений.), а также при дискинезии желчевыводящих путей (замедление их двигательной активности). Такого рода нарушения приводят к перерастяжению капилляров желчного пузыря, повышенному давлению желчи, микроразрывам, а также к повышению проницаемости стенок желчевыводящих путей, на фоне чего желчные компоненты проникают в кровь, это и приводит к развитию гипербилирубинемии.

Это важно! И так, с помощью анализа на билирубин общий в сыворотке крови имеется возможность точно диагностировать наличие различных заболеваний, которые имеют косвенную или прямую связь с нарушением функций печени и желчных путей, а также процессов кроветворения.

В каких целях проводится анализ?

• Диагностика различных заболеваний крови, на фоне которых наблюдается повышенный распад эритроцитов (сфероцитоз, серповидно-клеточная, пернициозная/ сидеробластная анемия.
• Оценка состояния печени (целостность клеток).
• Для выявления гепатитов и степени их тяжести.
• Диагностика гемолитической и физиологической желтухи новорождённых.
• Определение проходимости желчных путей.
• Диагностика патологий поджелудочной железы, а также прочих тканей и органов, которые связаны с желчевыводящими путями.
• Оценивание тяжести состояния пациента при отравлении веществами, которые приводят к гемолизу эритроцитов.

При каких заболеваниях делают данный анализ?

1. Патологии печени;
2. Холестаз;
3. Гемолитическая анемия;
4. Дифференциальная диагностика желтух различного происхождения;
5. Вирусный гепатит;
6. При отравления различными химическими веществами.

О чем говорит понижение или повышение билирубина

Это важно! Повышенный уровень билирубина в сыворотке крови в большинстве случаев говорит о том, что имеет место процесс преждевременного распада эритроцитов, о повреждениях клеток печени, нарушениях оттока желчи. Если говорить о понижении общего билирубина, то данное состояние не имеет важного диагностического значения.

Необходимая подготовка к сдаче анализа

Следует отметить тот факт, что взятие крови производится натощак, необходимо отказаться от приема пищи за 8 часов до исследования. В качестве материала используется сыворотка крови. Необходимо избегать гемолиза. Срок выполнения данного анализа составляет 1 рабочий день.

Показатели общего билирубина

Референтные значения уровня билирубина в сыворотке следующие:

1. Общий билирубин: 3,4 — 17,1 мкмоль/л — для детей и взрослых (не считая периода новорожденности, у грудных детей уровень общего билирубина в крови высокий всегда, данное состояние называют физиологической желтухой.
2. Прямой билирубин: 0 — 3,4 мкмоль/л.

Анализ могут назначать следующие специалисты:

• Терапевт;
• Гематолог;
• Гастроэнтеролог;
• Педиатр;
• Инфекционист;
• Хирург;
• Неонатолог.

источник

Билирубин и его фракции

Для исследования общего билирубина и его фракций применяются:

1. Прямые спектрофотометрические методы, основаны на измерении абсорбции билирубина при 440‑460 нм, источником ошибок здесь является интерференция желтых небилирубиновых пигментов;

2. Ферментативные методы, основаны на окислении пигмента медьсодержащим ферментом билирубиноксидазой (КФ 1.3.3.5.), с образованием биливердина и исчезновением абсорбции при 460 нм. Методы этой группы точны и отличаются высокой специфичностью и чувствительностью;

3. Колориметрические диазометоды , базируются на взаимодействии билирубина с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием азопигментов. Под воздействием кислоты разрывается тетрапирроловая структура билирубина с образованием двух дипирролов, углеродные атомы метиленовых групп вступают в прямую реакцию с диазотированной сульфоновой кислотой (диазосмесь) с образованием розово-фиолетовых изомеров азодипиррола с максимумом поглощения при 530 нм. Связанный билирубин реагирует быстро, несвязанный –– только после добавления акселератора (кофеин, метанол, мочевина, бензоат или гидроокись натрия, уксусная кислота и другие). Последний освобождает билирубин из комплекса с белками и тем самым ускоряет реакцию азосочетания. Образовавшийся азокраситель ведет себя как кислотно-основной индикатор с несколькими цветными переходами: в сильнокислой среде он окрашен в фиолетовый цвет, в слабощелочной и слабокислой — в розовый, в сильнощелочной среде — в синий или зеленый цвета.

4. Электрохимические методы с использованием платинового и ртутного электродов;

5. Хроматографическое разделение отдельных фракций билирубина;

6. Флюорометрические методы, используется свойство свободного билирубина после поглощения при 430 нм испускать свет длиной 520 нм. Позволяют определить концентрацию неконъюгированного билирубина и, после обработки детергентом, общего билирубина главным преимуществом метода является возможность использовать микроколичества сыворотки.

Унифицированным методом определения количества билирубина в сыворотке является метод Йендрашика‑Клеггорна‑Грофа по диазореакции в щелочной или слабокислой среде в присутствии акселератора.

Определение концентрации билирубина и его фракций
в сыворотке крови по диазореакции

Принцип

Билирубин взаимодействует с диазотированной сульфоновой кислотой в присутствии кофеина с образованием окрашенных азопигментов.

Нормальные величины

Клинико‑диагностическое значение

Сыворотка

Накопление билирубина в крови свыше 43 мкмоль/л ведет к связыванию его эластическими волокнами кожи и конъюктивы, что проявляется в виде желтухи. Для дифференциальной диагностики желтух необходимо определить, за счет какой фракции возникает билирубинемия:

1. Гемолитическая или надпеченочная желтуха — ускоренное образование билирубина в результате внутрисосудистого гемолиза. Это гемолитические анемии различного происхождения: отравление сульфаниламидами,талассемии, сепсис, лучевая болезнь, несовместимость крови, врожденный сфероцитоз, серповидно-клеточная анемия, дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы.

В данном случае гипербилирубинемия развивается за счет фракции непрямого билирубина. Гепатоциты усиленно переводят непрямой билирубин в связанную форму, секретируют его в желчь, в результате в кале увеличивается содержание стеркобилина, интенсивно его окрашивая. В моче резко возрастает содержание уробилина, билирубин отсутствует.

У новорожденных гемолитическая желтуха может развиться как симптом гемолитической болезни новорожденного.

2. Паренхиматозная (печеночно-клеточная) желтуха – причиной может быть нарушение на всех стадиях превращения билирубина в печени: извлечение билирубина из крови печеночными клетками, его конъюгирование и секреция в желчь. Наблюдается при вирусных и других формах гепатитов, циррозе и опухолях печени, жировой дистрофии, при отравлении токсическими гепатотропными веществами, при врожденных патологиях.

Так как в печени недостаточно проходят все реакции превращения билирубина, гипербилирубинемия развивается за счет обеих фракций, преимущественно фракции прямого билирубина. Количество непрямого билирубина возрастает за счет функциональной недостаточности гепатоцитов и/или снижения их количества, а прямого — за счет увеличения проницаемости мембран клеток печени, также из-за нарушения секреции в желчь.

В моче определяется билирубин (цвет крепкого черного чая), умеренно увеличена концентрация уробилина, уровень стеркобилина кала в норме или снижен.

3. Механическая или подпеченочная желтуха развивается вследствие нарушения оттока желчи при закупорке желчного протока – желчные камни, новообразования поджелудочной железы, гельминтозы. Также подпеченочные желтухи выявляются при новообразованиях поджелудочной железы и гельминтозах.

В результате застоя желчи происходит растяжение желчных капилляров, увеличивается проницаемость их стенок. Не имеющий оттока в желчь прямой билирубин поступает в кровь и развивается гипербилирубинемия за счет увеличения концентрации прямого билирубина. В моче резко увеличен уровень билирубина (цвет темного пива) и снижено количество уробилина, в кале практически отсутствует стеркобилин (серовато-белое окрашивание).

В тяжелых случаях, вследствие переполнения гепатоцитов прямым билирубином, конъюгация его с глюкуроновой кислотой может нарушаться и в крови будет увеличиваться количество несвязанного билирубина, т.е. присоединяется печеночно-клеточная желтуха.

Закупорка внепеченочных желчных путей является классической причиной билирубинурии. Показатель полезен в дифференциальной диагностике желтух, поскольку билирубинурия характерна для обтурационной и паренхиматозной желтух (повышение уровня связанного билирубина в сыворотке), но отсутствует при гемолитической. При гепатите билирубин может быть обнаружен в моче до появления желтухи.

Амниотическая жидкость

Билирубин содержится почти исключительно в неэтерифицированном виде в комплексе с альбумином и накапливается при эритробластозе, инфекционном гепатите и серповидноклеточном кризе у матери.

источник

Лабораторная диагностика. Определение содержания билирубина и его фракций в сыворотке крови колориметрическим диазометодом (по Йендрашику-Клеггорну-Грофу)

Определение содержания билирубина и его фракций в сыворотке крови колориметрическим диазометодом (по Йендрашику-Клеггорну-Грофу)

Принцип метода. При взаимодействии сульфаниловой кислоты с азотистокислым натрием образуется диазофенилсульфониевая кислота, которая реагирует со связанным билирубином и дает красное окрашивание. По интенсивности его судят о концентрации билирубина, вступающего в прямую реакцию. При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива свободный билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние, благодаря чему он также вызывает красное окрашиваниераствора. По интенсивности последнего определяют концентрацию общего билирубина. Свободный билирубин равен разнице между общим и связанным.

Ход определения. В три пробирки (для определения уровня общего билирубина, связанной фракции и постановки контрольной пробы на цвет сыворотки) вводят реактивы согласно схеме (табл.2.).

Данные для определения уровня билирубина в сыворотке крови

Колориметрируют пробы при зеленом светофильтре (500-560 нм); применяют кювету с шириной слоя 5 мм. Оценку результатов проводят по калибровочному графику, построенному в соответствии с инструкцией к наборам реагентов «Билирубин – эталон» фирмы «Лахема».

Находят содержание общего и связанного билирубина в мкмоль/л. Для определения уровня свободной фракции из цифр общего билирубина вычитают показатель конъюгированного.

В норме концентрация общего билирубина в плазме (сыворотке) крови составляет 8,55-20,52 мкмоль/л. 75% его количества приходится на долю свободной фракции.

Средние величины содержания в плазме общего, конъюгированного и свободного билирубина составляют соответственно 11,12; 2,57 и 8,56 мкмоль/л.

Клинико-диагностическое значение исследования

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Студент — человек, постоянно откладывающий неизбежность. 11126 — | 7497 — или читать все.

источник

Определение билирубина в крови

Как определяется билирубин в крови и его нормы

Билирубин – сложный компонент, является одним из главных составляющих желчи в организме. Образуется под воздействием расщепления эритроцитов. Выделяется печенью. Покидает организм в составе желчи. Выводится из организма с испражнениями через кишечник.

Повышение или понижение билирубина может свидетельствовать о ряде заболеваний органов брюшной полости у взрослых. В данной статье мы рассмотрим влияние билирубина на организм новорожденных детей.

Повышение данного компонента происходит вследствие незрелости печеночных ферментов у младенцев. Главный признак высокого билирубина – пожелтение склер и кожи новорожденного. Такое явление называется «желтухой». Согласно статистике, 60% новорожденных рождаются с желтухой.

Билирубин содержится в крови в двух фракциях: свободной и связанной.

Билирубин Свободный (непрямой) – образуется при распаде гемоглобина и расщепления эритроцитов. Является ядовитым, поскольку не успевает пройти фильтрацию печенью. Не растворим в воде. Попадает с кровью в печень, где становится растворимым. Негативно влияет на клетки за счет своей токсичности.

Билирубин Связанный (прямой) – производная непрямого билирубина. Обладает меньшей токсичностью, поскольку проходит фильтрацию печенью. Экскретируется жёлчными протоками. Далее попадает в тонкую кишку и выводится из организма.

Очень высокое содержание билирубина опасно таким явлением как гипербилирубинемия. У новорожденных оно может вызывать тяжелые нарушения функций мозга, потерю слуха, повреждение центральной нервной системы, даже летальный исход. Все это происходит за счет сильного токсического действия непрямого билирубина в крови.

Показания к проведению исследования на определение билирубина в крови

— Оценка функционирования печени.
— Диагностика и определение вида желтух.
— Диагностика анемий.
Лабораторные исследования включают в себя определение общего и прямого билирубина. Величина непрямого рассчитывается как разница между прямым и общим.

Как берется анализ у новорожденных

Обычно кровь берется из пятки. Место укола протирается спиртом, затем стерильным скальпелем или шприцом производится забор крови в пробирку.

Существуют современные скрининг-тесты, позволяющие определить билирубин через кожу. Такой метод хорош своей безболезненностью, но, к сожалению, он не слишком распространен.

В современных лабораториях в основном используют диазреактивы для определения реакции. Для этого сыворотка крови смешивается с реактивом. Результат определяется по скорости реакции.

— Прямая быстрая реакция окрашивает сыворотку в розовый цвет. Это свидетельствует о механической желтухе.
— Прямая замедленная реакция окрашивает сыворотку в течение нескольких минут. Это свидетельствует о паренхиматозной желтухе.
— Непрямая реакция окрашивает сыворотку в фиолетовый цвет. Это свидетельствует о развитии различных анемий или гемолитической желтухе.
Таким образом, можно говорить о достаточно точном диагностировании желтух по уровню билирубина.

Нормальный уровень билирубина для новорожденных – понятие относительное, поскольку его концентрация может падать каждые 3 часа. На результат анализа могут повлиять такие факторы как:

— срок рождения ребенка (доношенный или нет);
— его возраст в часах;
— нормы измерения конкретной лаборатории.

Примерные значения нормального уровня билирубина

Таблица норм для новорожденных в возрасте до 7 дней:

Возраст Недоношенные Доношенные

Меньше 24 часов 170 ммоль/л

Старше 72 часов > 340 ммоль/л

Данные показатели актуальны для новорожденных, находящихся еще в роддоме. Поскольку физиологическая желтуха – явление довольно частое, детям первого месяца жизни иногда не назначается данный вид анализов при отсутствии жалоб в его поведении. Повышенные показатели в таком возрасте часто происходят за счет фракции непрямого билирубина. Происходит усиленное разрушение эритроцитов. Если процесс желтухи затянулся, пожелтение кожных покровов не проходит или усугубилось со временем, анализ на определение билирубина обязателен.

Для примера возьмем новорожденного, возрастом более двух недель.

Концентрация общего билирубина

До 85 ммоль/л Легкая форма желтухи

86-169 ммоль/л Форма средней тяжести

Свыше 170 ммоль/л Тяжелая форма

Данное исследование актуально для новорожденных, поскольку помогает выявить вид желтухи и необходимость ее лечения. Если физиологическая желтуха проходит сама по себе, то перенесенная ядерная желтуха может привести к умственным и неврологическим отклонениям в развитии ребенка. Важно не пропустить этот момент, и вылечить повышенный билирубин вовремя.

Если понравилась статья помогите проекту, поделитесь в соцсетях.

источник