Реакция латекс-агглютинации
Историческая справка
Впервые метод реакции латекс-агглютинации (РЛА) был предложен в 1956 году и использован для определения ревматоидного фактора с помощью полистирольных латексных микросфер с узким распределением частиц по размеру, покрытых гамма-глобулином человека. Сообщалось, что взаимодействие антигенов, находящихся в сыворотке крови пациента, с гамма-глобулином, адсорбированным на поверхности гидрофобных микросфер суспензии, привело к агглютинации полимерных частиц и образованию крупных агломератов, легко различимых невооруженным глазом. В последующие годы метод РЛА получил широкое распространение, как в клинических диагностических тестах, так и в биохимических и иммунологических исследованиях. Особенно широкое применение РЛА наблюдается в инфекционной патологии.
Описание метода реакции латексной агглютинации
Реакция латексной агглютинации используется в клинической химии в течение многих лет как простой, быстрый и недорогой метод определения белков, гормонов и других биологически активных соединений. Белки, являясь поливалентными антигенами, вступают в реакцию с антителами с образованием иммунных комплексов, или агглютинатов. Как правило, иммунные комплексы слабо визуализируются не только невооруженным глазом, но и с помощью фотометрических методов. Использование дисперсионных полимеров (латексов), сенсибилизированных антителами или антигенами, позволяет значительно облегчить детекцию реакции агглютинации, которая в этом случае называется реакцией латексной агглютинации.
Носители для метода реакции латексной агглютинации
Наиболее часто для получения диагностических препаратов используют полистирольные микросферы, несущие на своей поверхности различные функциональные группы (карбоксильные, эпоксидные, альдегидные и др.) и полиакролеиновые микросферы, содержащие на своей поверхности альдегидные функциональные группы, способные вступать в реакцию с первичными аминогруппами, образуя основание Шиффа Применение инертных синтетических носителей для иммобилизации антител (или антигенов) является широко распространенным методическим подходом в иммуноанализе.
Полимерные микросферы с узким распределением частиц по размерам и функциональными группами на поверхности представляют большой интерес для биологии и медицины, в частности для использования в качестве носителей биолигандов вместо эритроцитов при создании диагностических тест-систем на различные виды заболеваний. Замена эритроцитов на полимерные микросферы является решением проблем, связанных с недостатками эритроцитарных диагностикумов, а именно:
- 1) эритроциты получают из крови животных, содержание которых трудоемко и дорогостояще
- 2) эритроциты содержат много антигенных детерминант, которые реагируют с компонентами сывороток человека и животных, что обуславливает протекание неспецифических реакций и приводит к ложноположительным результатам
- 3) свойства эритроцитов часто зависят от источника и способа их выделения
- 4) диагностикум на основе клеток одних и тех же животных не дает постоянный титр и после длительного хранения не сохраняет прежнюю степень агглютинации.
Для замены эритроцитов, полимерные микросферы должны обладать определенными свойствами: скорость седиментации 3 – 8 мм/час, диаметр частиц порядка 5 мкм., агрегативная устойчивость в воде и буферных растворах высокой ионной силы, наличие в поверхностном слое функциональных групп, доступных для ковалентного связывания с функциональными группами белков.
Одним из преимуществ применения полимерных микросфер в качестве носителей биолигандов является возможность получения полимерных частиц с заданным комплексом свойств. Для устранения проблем, связанных с применением эритроцитов, используются полимерные микросферы с определенными свойствами:
- 1) монодисперсное распределение по размерам
- 2) сферическая форма
- 3) устойчивость к электролитам в широком интервале pH
- 4) способность присоединять биологические макромолекулы без значительного изменения их функциональной активности
- 5) воспроизводимые свойства и характеристики
Однородность частиц по размерам позволяет достаточно точно определить площадь поверхности носителя и установить степень ее покрытия биолигандом, кроме того, она обусловливает сходный характер их поведения во время агглютинации, что облегчает “прочтение” результатов реакции латекс-агглютинации(РЛА). Впервые, для создания диагностических тест-систем были использованы полистирольные микросферы. Полистирол, благодаря своей оптической прозрачности, высокой адсорбционной способности, прочности и хорошей воспроизводимости свойств, успешно используется в качестве носителя.
Главной проблемой полимерных микросфер, используемых при создании диагностикумов является неспецифическая агглютинация(частицы отрицательного контроля образуют ореол из частиц вокруг центра дна лунки) , причины которой и факторы ее вызывающие во многом еще не ясны. Наибольшее распространение в качестве способов уменьшения неспецифического связывания нашли значительное разбавление образцов, добавление детергентов, экранирование поверхности частиц низкомолекулярными белками. Однако применение данных методов чаще всего приводит к уменьшению чувствительности и точности реакции латексной агглютинации.
При тщательной отработке методики получения латексных диагностикумов, соблюдении оптимальных условий их приготовления и постановки самой реакции, РЛА может приближаться к самым современным иммунологическим методам.
РЛА сходна с РНГА по принципу сорбции антител на поверхности более крупных частиц.
Преимущества метода РЛА
Реакция РЛА — экспресс-метод диагностики инфекционных болезней (время проведения — до 10 мин, возможно обнаружение антигена в небольшом объёме исследуемого материала). Для постановки РЛА используют стеклянные или темнопольные пластины.
РЛА в качестве сигнального экспресс-теста для выявления антигенов микроорганизмов удобна при использовании в практических лабораториях, а также при проведении массовых обследований. К преимуществам РЛА, как метода серологической диагностики бактериальных и вирусных инфекций, можно отнести следующие моменты:
- — высокую специфичность и чувствительность;
- — отсутствие необходимости в сложной аппаратуре для постановки и реакции и регистрации результатов;
- — сведение до минимума количества компонентов реакции;
- — возможность получения инертных носителей с заданными характеристиками.
Относительная дешевизна метода реакции латексной агглютинации (РЛА), простота и возможность постановки теста практически в любых условиях делают его очень удобным как при одиночных, так и при массовых исследованиях даже в небольших клинических мало оборудованных лабораториях.
Применение метода реакции латексной агглютинации
РЛА применяют для индикации антигенов Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типа b( Neisseria meningitidis в СМЖ, выявления стрептококков группы А в мазках из зева, в диагностике сальмонеллёзной инфекции, иерсиниозов и других заболеваний. Чувствительность метода — 1-10 нг/мл (103-106 бактериальных клеток в мл). Недостаток метода — возможность получения артефактов, особенно в присутствии ревматоидных факторов и продуктов фибринолиза плексы с участием комплемента — преципитаты. Простейший пример качественной реакции преципитации — образование непрозрачной полосы преципитации в пробирке на границе наслоения антигена на иммунную сыворотку (реакция кольцепреципитации). Реакцию преципитации проводят в гелях агара, агарозы. Их используют для выявления и изучения свойств разнообразных антигенов и антител.
Материалы и реагенты для метода реакции латексной агглютинации
- 1. Суспензия латекса. Для приготовления диагностикумов обычно используют частицы латекса диаметром 0,81…1 мкм. При применении более крупных частиц диаметром 0,22…0,3 мкм затруднен учет реакции и технологический процесс получения диагностикумов резко усложняется, а частиц более 1 мкм хотя не влияет на активность латексных диагностикумов, но существенно увеличивает частоту неспецифических реакций. Для постановки РАЛ лучше использовать очищенные латексы с гомогенными частицами правильной сферической формы. Густота суспензии латекса обычно составляет 1 %, но может достичь в отдельных случаях 1,3…1,4 %.
- 2. Буферные растворы. Для приготовления суспензии сенсибилизированных частиц латекса может быть использован изотонический раствор хлорида натрия, однако целесообразнее применять буферные растворы: трисовый (pH 7,2…8,2), трис-солянокислый (pH 7,2), глициновый (pH 8,2), гликолевый, боратно-солевой и др. В этом случае желательно проводить предварительную апробацию системы «латекс — буфер» в экспериментальных условиях и выбор оптимального варианта для практической работы. Иногда в процессе приготовления латексного диагностикума возникает необходимость в использовании нескольких различных буферных растворов.
- 3. Антитела. Для сенсибилизации частиц латекса пригодны гипериммунные сыворотки, полученные при иммунизации лабораторных животных (кроликов, крыс, мышей и др.). Повышению специфичности РАЛ и уменьшению числа ложноположительных и перекрестных реакций способствует применение очищенных иммуноглобулиновых фракций.
источник
Реакция агглютинации латекса
Реакция агглютинации латекса (РАЛ), или реакция латекс-агглютинации, разработана давно, однако она не нашла достаточно широкого применения в медицине и в ветеринарии.
Тем не менее усиливающаяся тенденция использовать в качестве носителей антигенов и антител инертные синтетические материалы привела к оживлению интереса к РАЛ и широкому изучению возможностей ее применения.
Принцип метода. Механизм РАЛ аналогичен РИГА, в которой используют сенсибилизированные антигенами или антителами эритроциты человека или животных. Для постановки РАЛ применяют сенсибилизированные частицы полистирольного латекса, которые в присутствии гомологичного реагента склеиваются. Обычно эта реакция проходит очень быстро (3…8 мин), что позволяет применить ее в качестве экспресс-метода для выявления антигенов и антител.
Преимущества РАЛ в том, что частицы латекса в отличие от эритроцитов не имеют перекрестно реагирующих антигенов, поэтому она специфичнее РИГА.
Материалы и реагенты. 1. Суспензия латекса. Для приготовления диагностикумов обычно используют частицы латекса диаметром 0,81…1 мкм. При применении более крупных частиц диаметром 0,22…0,3 мкм затруднен учет реакции и технологический процесс получения диагностикумов резко усложняется, а частиц более 1 мкм хотя не влияет на активность латексных диагностикумов, но существенно увеличивает частоту неспецифических реакций.
Для постановки РАЛ лучше использовать очищенные латексы с гомогенными частицами правильной сферической формы. Густота суспензии латекса обычно составляет 1 %, но может достичь в отдельных случаях 1,3…1,4 %.
2. Буферные растворы. Для приготовления суспензии сенсибилизированных частиц латекса может быть использован изотонический раствор хлорида натрия, однако целесообразнее применять буферные растворы: трисовый (pH 7,2…8,2), трис-солянокислый (pH 7,2), глициновый (pH 8,2), гликолевый, боратно-солевой и др. В этом случае желательно проводить предварительную апробацию системы «латекс — буфер» в экспериментальных условиях и выбор оптимального варианта для практической работы. Иногда в процессе приготовления латексного диагностикума возникает необходимость в использовании нескольких различных буферных растворов.
3. Антитела. Для сенсибилизации частиц латекса пригодны гипериммунные сыворотки, полученные при иммунизации лабораторных животных (кроликов, крыс, мышей и др.). Повышению специфичности РАЛ и уменьшению числа ложноположительных и перекрестных реакций способствует применение очищенных иммуноглобулиновых фракций.
Методика исследования. Основные этапы постановки РАЛ. В настоящее время РАЛ обычно ставят на стеклянных или полистироловых пластинках, используя коммерческие диагностикумы или препараты. Реже применяют пластинки с лунками для постановки РИГА или пробирочный вариант реакции. Манипуляции выполняют в определенной последовательности.
1. Делают ряд серийных разведений исследуемого материала. Сыворотки крови необходимо предварительно прогреть в течение 30 мин при 56 °С или 20 мин при 60 °С. При постановке РАЛ на пластинках для РИГА при разведении материала используют петли микротитратора. На плоские ровные пластины наносят по одной капле соответствующих разведений.
2. Добавляют к каждому разведению равный объем суспензии сенсибилизированного латекса. Смешивают 1 каплю исследуемого материала и диагностикум, в лунки вносят по 15, 25 или 50 мкл ингредиентов реакции.
При постановке РАЛ в пробирочном варианте используют 0,25 мл исследуемого материала и 0,05 мл (или 0,1 мл) диагностикума.
3. Помещают пластинки на вращающийся столик или в шуттель-аппарат на 3…5 мин, после чего производят регистрацию результатов реакции.
Учет результатов. Независимо от вида диагностикума и количества антител (антигена) в исследуемом материале результаты РАЛ могут быть учтены уже через несколько минут после смешивания реагентов. При наличии в исследуемом образце искомого микроорганизма склеивающиеся частицы латекса образуют агглютинат, хорошо видимый невооруженным глазом. Можно использовать лупы с небольшим увеличением. При отрицательных результатах реакции суспензия латекса остается гомогенно-мутной, без глыбок агглютината и участков просветления. При малой или низкой активности диагностикума, а также невысокой концентрации антигена пластинки лучше инкубировать при 37 °С, что несколько ускоряет образование агглютината.
Результат реакции оценивают по трехбалльной системе:
«++++» — четкая агглютинация, крупные хлопья в прозрачной жидкости;
«++» — четкая видимая агглютинация диагностикума, однако фон полностью не просветляется;
«-» — жидкость остается гомогенно-мутной (отрицательная реакция).
Применять промежуточные оценки интенсивности реакции («+++», «+») нецелесообразно, так как они достаточно субъективны.
Ставят несколько контролей: 1) исходное разведение исследуемого материала + суспензия несенсибилизированного латекса (отрицательный контроль); 2) нормальная сыворотка, не содержащая антител + суспензия сенсибилизированного латекса (проверка специфичности диагностикума); 3) гомологичная иммунная сыворотка + суспензия сенсибилизированного латекса (проверка активности диагностикума).
При постановке РАЛ с антительными латексными диагностикумами в контрольных положительной и отрицательных реакциях используют соответствующий антигенсодержащий материал.
Техника приготовления диагностикумов. Сенсибилизация латекса антигенами. Для приготовления антигенного латексного диагностикума желательно иметь в распоряжении растворимые антигены. В этом случае хорошие результаты получают при использовании буферных растворов (например, глицинового или боратного с pH 8,2). В таком буфере готовят раствор антигена в концентрации 2,5…5,0 мг/мл к 1 объему суспензии латекса. Если раствор антигена приготовлен на изотоническом растворе натрия хлорида, то буфер добавляют к смеси латекс — антиген.
Сенсибилизацию проводят в течение 2 ч при 37 °С в термостате или (лучше) на водяной бане. По истечении этого времени сенсибилизированный латекс осаждают центрифугированием в течение 5…10 мин при частоте оборотов 2000…2500 мин -1 и ресуспензируют в этом же буферном растворе до получения 1%-й суспензии.
Сенсибилизация латекса антителами. Суспензию латекса смешивают с равным объемом иммунной сыворотки или очищенной гамма-глобулиновой фракции в соответствующем буферном растворе. Смесь инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре или при 37 °С, центрифугируют в течение 30 мин при частоте оборотов 3…5000 мин -1 и дважды промывают осадок 0,01 М трис-солянокислым буфером с добавлением 200 мг/л поливинилпирролидона. Сенсибилизированный латекс ресуспензируют в этом же буферном растворе с поливинилпирролидоном и 0,05 % азида натрия и хранят в холодильнике при 2…4 °С.
При выборе оптимальной дозировки антител для сенсибилизации латекса следует учитывать, что одна его частица диаметром 0,8 мкм может адсорбировать на своей поверхности до 7,5 ∙ 10 4 молекул гамма-глобулина.
Необходимо отметить, что во многом требуется предварительно эмпирическим путем подбирать оптимальные условия для получения высококачественного латексного диагностикума. Режим сенсибилизации зависит от сорта и размера частиц латекса, pH и вида буферных растворов и ряда других факторов.
Для уменьшения частоты ложноположительных результатов рекомендуется к готовой суспензии сенсибилизированных частиц латекса добавлять нормальную сыворотку того вида животного, который был использован для приготовления гипериммунной сыворотки.
Получение латексных диагностикумов с помощью белка А стафилококка. Применение для изготовления диагностикумов на основе частиц латекса, покрытых белком А стафилококка, позволяет использовать для сенсибилизации латекса любые иммунные сыворотки без какой-либо их предварительной обработки.
Раствор белка А (1 мг/мл) готовят на дистиллированной воде с добавлением 0,05 % азида натрия. Перед применением его разводят в 200 раз 0,1 М глициновым буфером (pH 8,2), содержащим 1 % хлорида натрия. Стандартную коммерческую суспензию латекса разводят в 15 раз изотоническим раствором хлорида натрия, смешивают с равным объемом разведенного раствора белка А, инкубируют при постоянном перемешивании в течение 2…4 ч при 20 °С, а затем 16…18 ч при 4 °С. Частицы латекса, покрытые белком А, осаждают центрифугированием при частоте вращения 6000 мин -1 в течение 30 мин и дважды промывают половинным объемом глицинового буфера с добавлением 0,02 % поливинилпирролидона. Полученную суспензию после добавления 0,05 % азида натрия можно хранить при 4 °С в течение 4 мес.
Иммунную сыворотку разводят до титра глициновым буфером и смешивают с равным объемом суспензии латекса, покрытого белком А. Инкубацию и промывку сенсибилизированного антителами латекса проводят по методике, описанной выше.
Эту же методику можно использовать и для сенсибилизации латекса гамма-глобулиновыми фракциями, выделенными из иммунных сывороток посредством их насыщения сульфатом аммония. В этом случае продолжительность сенсибилизации антителами частиц латекса, покрытых белком А, можно сократить до 2 ч, исключив длительный 2-й этап, проводимый при 4 °С. Приготовленный таким образом диагностический препарат в 4…16 раз активнее обычного антигельного латексного диагностикума.
Практическое использование. К сожалению, в практических ветеринарных лабораториях РАЛ практически не используют, несмотря на то что она по чувствительности и специфичности превосходит многие классические серологические методы.
В настоящее время имеются сообщения об успешном применении РАЛ для диагностики туляремии, бруцеллеза, ряда вирусных инфекций. При использовании данных диагностикумов чувствительность РАЛ на стекле составляет 10 6 м. т./мл, а при постановке в полистироловых пластинках — 1,8 ∙ 10 4 м. т./мл (бруцеллез) и 1,25 ∙ 10 5 м. т./мл (туляремия). Кроме того, разработаны латексные диагностикумы для выявления возбудителей иерсиниоза, псевдотуберкулеза, листериоза, сальмонеллеза. Имеются также сведения об успешных испытаниях специально разработанного для ветеринарии латексного антигенного диагностикума для выявления антител к возбудителю туберкулеза.
Безусловные преимущества РАЛ: 1) простота постановки; 2) отсутствие какого-либо специального оборудования; 3) достаточно высокие чувствительность и специфичность.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.
источник
РФ-латекс-тест
Показания к применению
Выявление и определение концентрации РФ в сыворотке крови человека для диагностики ревматоидного артрита, изучения динамики болезни и контроля проводимой терапии.
Действующее вещество
Лекарственная форма
набор диагностический многокомпонентный
Противопоказания
Как применять: дозировка и курс лечения
Отбор и хранение образцов
Использовать свежую свободную от примесей сыворотку крови.
Хранить образцы не более 72 часов при 2-8°С. Длительное хранение допускается в замороженном виде при температуре не выше минус 20°С. Не подвергать образцы повторному замораживанию и оттаиванию.
Исследуемая сыворотка или плазма должна быть прозрачной и не содержать взвешенных частиц. При необходимости отцентрифугировать недостаточно прозрачные образцы перед анализом. Использование гемолизированных образцов не допускается.
Подготовка реагентов и материалов
Выдержать все компоненты диагностикума и исследуемые образцы не менее 15 мин при комнатной температуре.
Жидкие контрольные сыворотки и глицин-фосфатный буферный раствор готовы к применению.
Подготовить дополнительное оборудование:
— пластину стеклянную, или тестовый слайд;
— микропипетки автоматические или пипетки-мешалки пластиковые (на 50 мкл);
— палочки стеклянные или пипетки-мешалки пластиковые;
— планшет для серологических исследований;
1) Все компоненты диагностикума содержат в качестве консерванта токсичное вещество — азид натрия; при использовании диагностикума необходимо соблюдать правила безопасной работы с токсичными материалами.
2) При работе с исследуемыми образцами сыворотки необходимо обращаться как с потенциально инфицированными материалами.
Нанести на стеклянную пластину (в первую ячейку тестового слайда) 50 мкл К+, рядом, с интервалом 3 см (или в соседнюю ячейку слайда) — 50 мкл К-. На оставшееся место (в свободные ячейки) с аналогичным интервалом нанести по 50 мкл исследуемых образцов. Исследуемую сыворотку не разводить!
Легким встряхиванием флакона перемешать ДРФ-латекс и добавить по 50 мкл в каждую ячейку с образцом. Плоским концом пипетки-мешалки (стеклянной палочкой) тщательно перемешать каждую каплю, распределив реакционную смесь на площади диаметром около 2 см (по всей площади ячейки). Для каждой капли использовать новую пипетку-мешалку (стеклянную палочку).
Покачивать пластину (слайд) вручную или на механическом ротаторе в течение 2 минут, после чего сразу произвести учет результатов реакции.
В лунках планшета приготовить следующие разведения исследуемого образца в глицин-солевом буфере: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и 1:64.
Нанести по 50 мкл каждого разведения исследуемого образца, а также по 50 мкл К+ и К- на стеклянную пластину с интервалом 3 см (или в соответствующие ячейки слайда).
Легким встряхиванием флакона перемешать РФ-латексный реагент и добавить по 50 мкл в каждую ячейку с разведением исследуемого образца и с контрольными образцами, после чего перемешать каждую каплю, как указано выше для качественного определения.
Покачивать пластину (слайд) вручную или на механическом ротаторе в течение 2 минут, после чего произвести учет результатов реакции.
Учет результатов проводить визуально на темном фоне при хорошем освещении.
Учет реакции позднее 2 мин после ее начала может дать искаженные результаты за счет неспецифической агглютинации частиц.
Положительной РАЛ считается наличие агглютинации латекса (появление зернистости или различимых частиц).
Отрицательной РАЛ считается отсутствие агглютинации (сохранение равномерно мутного фона).
Результаты реакции с исследуемыми образцами учитываются только при положительной реакции с К+ и отрицательной реакции с К-.
Положительная реакция в качественном определении свидетельствует о наличии РФ в образце в концентрации не менее 8 МЕ/мл..
Отрицательная реакция в качественном определении свидетельствует, что концентрация РФ находится в норме.
Все образцы, давшие положительную реакцию, подлежат дополнительному исследованию для определения концентрации РФ.
Минимальная концентрация РФ, при которой наблюдается положительная реакция, составляет 8 МЕ/мл. Величина, обратная максимальному разведению, давшему положительную реакцию, является титром РФ.
Таким образом, концентрация РФ в исходном образце сыворотки (плазмы) крови рассчитывается по формуле:
Концентрация РФ(МЕ/мл) = 8(МЕ/мл) х Титр Пример: макс, разведение = 1:32; титр = 32; концентрация РФ(МЕ/мл) = 8×32 = 256.
Концентрация РФ при ревматоидном артрите коррелирует с активностью процесса, что делает этот показатель полезным для установления стадии и прогноза течения заболевания. Исследование образцов, отобранных повторно через определенные периоды времени, можно применять для наблюдения за результатами лечения.
В высоких концентрациях РФ характерен для ревматоидного артрита. Указанием на возможное наличие его активной формы служит уровень РФ в сыворотке или плазме крови от 120 МЕ/мл и выше. РФ может выявляться также (в основном в более низких титрах) при некоторых других заболеваниях, таких как системная красная волчанка, болезнь Шегрена, бактериальный эндокардит, ряде хронических инфекционных процессов и у отдельных здоровых людей. В то же время отрицательная реакция на РФ не может исключить наличие у пациента ревматоидного артрита.
Фармакологическое действие
Диагностикум латексный для определения ревматоидного фактора жидкий (РФ-латекс-тест) представляет собой 1,5 % суспензию монодисперсного полистирольного латекса с иммобилизованным на поверхности его частиц иммуноглобулином сыворотки крови человека. Суспензия белого цвета, при хранении разделяется на белый осадок, легко разбивающийся при встряхивании, и прозрачную или слегка опалесцирующую надосадочную жидкость.
Диагностикум выпускается в комплекте с глицин-солевым буферным раствором (БР) — прозрачная бесцветная жидкость, положительной контрольной сывороткой (К+) и отрицательной контрольной сывороткой (К-) — прозрачные или желтоватого цвета жидкости.
Принцип работы РФ-латекс-теста основан на взаимодействии ревматоидного фактора (РФ), представляющего собой аутоантитела к Fc-фрагменту иммуноглобулина G человека, с IgG, находящимся на поверхности латексных частиц. Результатом взаимодействия является агглютинация латекса с образованием мелких или крупных зерен, различимых визуально.
Чувствительность диагностикума позволяет обнаруживать ревматоидный фактор в концентрации 8 международных единиц (МЕ)/мл в неразведенной сыворотке крови человека.
источник