Спермограмма mar тест с фрагментацией днк в спермограмме

Содержание

Фрагментация ДНК сперматозоидов — сдать анализ

Срок готовности: 1-3 рабочих дня

Биоматериал: сперма (эякулят)

Фрагментация ДНК сперматозоидов: что это и как ее измерять

В лаборатории СПЕРМА-ТЕСТ определение индекса фрагментации ДНК проводится методом HALO.

Что такое тест для оценки фрагментации ДНК?

HALO-тест это актуальный метод оценки целостности ДНК. Поэтому сначала мы рассмотрим его.
В отличие от других методов, HALO выявляет и “подсвечивает” не поврежденную, а целую ДНК. Вокруг “здоровых” сперматозоидов с неповрежденной ДНК формируется ореол, который отчетливо виден на оптическом микроскопе. Таких ореолов нет у мужчин с поврежденной ДНК.

Анализ выполняют спустя 30-60 минут после разжижения эякулята. Оценивают от 200 до 500 сперматозоидов с хвостами (незрелые не оценивают).

Тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов: фото с микроскопа

У сперматозоидов с неповрежденной ДНК-молекулой есть четкий большой ореол. У сперматозоидов с фрагментацией (разрывами) ДНК такого ореола нет или он не четкий.

В основе теста HALO лежит метод SCD (запатентован компанией Halotech) . На сегодняшний момент этот метод активно используется в клинической практике и участвует во множестве клинических испытаний. HALO считается более чувствительным тестом, по сравнению с остальными.

Референсное значение (норма) для этого теста – 20% и ниже.

Это значит, что сперматозоидов с фрагментацией ДНК должно быть меньше 20% от общего количества.

Как проводится анализ фрагментации ДНК (HALO-тест)?

Лаборант смешивает сперму со специальным реактивом, запуская тем самым процесс денатурации ДНК, а затем окрашивания. Если ДНК спермы не повреждена (не фрагментирована), вокруг плотного центрального ядра ДНК образуется четкий «ореол». Если ДНК спермы имеет разрывы, то ореола нет, даже если он проявляется, то очень тонкий и неясный. Это хорошо видно под микроскопом, когда сперматолог-эмбриолог считает сперматозоиды с фрагментированной ДНК. Результат подсчета выражается в процентах, и в норме он не должен быть более 20%.

Для полноты обследования параллельно с анализом фрагментации ДНК обычно выполняют спермограмму и ЭМИС (электронно-микроскопическое исследование спермы). Если они были сделаны ранее, но не более 3 месяцев назад, покажите их врачу на консультации. Все 3 анализа можно провести из одной порции спермы.

Как сдавать сперму и готовиться к анализу?

Подготовка подразумевает воздержание в течение 2–5 дней.

Метод сбора эякулята — мастурбация.

Ёмкость для сбора эякулята — стерильный контейнер (бесплатно у администратора лаборатории)

Непосредственно перед сбором материала нужно освободить от содержимого мочевой пузырь и помыть половые органы

Если тест проводится неоднократно, продолжительность воздержания должна быть всегда одинаковой. Это важно для сравнения результатов в динамике.

Если образец собирается дома, то доставить контейнер в лабораторию должен курьер в контейнере, поддерживающим температуру.

Результат теста на фрагментацию и его расшифровка

У каждого теста свои нормы (референсные значения). После проведения исследования формируется протокол, где указан индекс фрагментации ДНК.

Ниже описаны варианты результатов и рекомендации по тактике лечения. Эти рекомендации основаны на исследованиях, проводимых реальными научными группами за последние 10 лет. Это ценный исследовательский опыт, но это все равно только рекомендации. Интерпретировать результаты должен ваш лечащий врач и исходя из истории болезни предлагать варианты лечения.

Что показывает индекс фрагментации? Он отражает процентное соотношение между «здоровыми» сперматозоидами и сперматозоидами с разрывами в ДНК-цепочках.

Рассмотрим расшифровку на примере норм для HALO-теста.

Если результат выше 50% рекомендуется воспользоваться ИКСИ-технологией. При таких результатах ИКСИ будет эффективнее ЭКО.

Если результат выше 60% шансы на беременность даже с применением вспомогательных репродуктивных технологий крайне низкие. Лучше использовать сперму донора.

Важно

Если индекс фрагментации ДНК сперматозоидов равен 50% и более, даже при использовании репродуктивных технологий наступление беременности маловероятно.

Получили результат на руки? Покажите андрологу.

Фрагментация ДНК сперматозоида и мужское бесплодие

Одна из причин мужского бесплодия – это повреждение (фрагментация) цепочки ДНК, находящейся в ядре головки сперматозоида. Именно в молекуле этой нуклеиновой кислоты закодирована и хранится вся генетическая информация, которая при зачатии передается ребенку. И чем больше в молекуле ДНК таких разрывов, тем меньше вероятность оплодотворения яйцеклетки сперматозоидом.

Фрагментация ДНК: что покажет спермограмма?

Спермограмма — золотой стандарт первичной оценки качества спермы. Нормы спермограммы не пересматривались с 2010 года. С введением оценки морфологии по Крюгеру, этот анализ достиг максимальной диагностической значимости. Однако до сих пор спермограмма не может объяснить даже половины случаев мужского бесплодия. Поэтому репродуктологам пришлось искать другие, более глубокие и конкретные методы исследования.

Диагностировать разрывы ДНК при проведении спермограммы невозможно. Сперматозоиды с поврежденной ДНК обычно сохраняют хорошую подвижность. Иногда они даже способны к оплодотворению, но наступившая беременность замирает или прерывается уже на ранних сроках.

За последние 10 лет наука убедилась, что повреждения ДНК сперматозоидов напрямую связаны с нарушениями оплодотворения, задержками развития эмбриона, плохой имплантацией, выкидышами. Т.е. со всеми сложностями наступления и начала протекания беременности.

У меня хорошая спермограмма. Не выявлено никакой патоспермии. Зачем мне сдавать анализ на фрагментацию сперматозоида?
Исследования 2016 года показали, что 10% мужчин с нормальными показателями спермограммы имели высокий индекс фрагментации ДНК сперматозоидов и входили в категорию пациентов с идиопатическим бесплодием (т.е. бесплодие по неизвестным причинам). Поэтому есть вероятность, что у вас аналогичный случай. И тогда ваши сперматозоиды с нормальной подвижностью и морфологией будут усиливать шансы на успешную беременность.

Кому назначают Исследование фрагментации ДНК?

Показания для назначения тестов на ДНК-фрагментацию:

идиопатическое (необъяснимое) мужское бесплодие
замершая беременность (задержка развития эмбриона)
многократное и безуспешное ЭКО\ИКСИ
повторяющиеся выкидыши
варикоцеле
возраст мужчины 45 лет и более

Кроме того, тест на фрагментацию ДНК проводится перед замораживанием донорской спермы для оценки ее качества и во время подготовки к проведению ЭКО (экстракорпорального оплодотворения) или ИКСИ (интрацитоплазматического введения сперматозоидов).

Анализ фрагментации ДНК и ВРТ (ЭКО, ИКСИ)

Анализ фрагментаций ДНК помогает определить какой именно из методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) поможет конкретной паре. Так, парам, с низким и средним количеством повреждений ДНК у мужчины помогут внутриматочная инсеминация (IUI) и экстрокорпоральное оплодотворение. А парам с высоким уровнем повреждения ДНК поможет ИКСИ (ICSI).

Единственная группа пар, для которых анализ повреждений ДНК не принесет пользы это те,в которых у мужчины диагностирована и подтверждена олигоастенотератозооспермия (т.е. 3 патоспермии сразу). Таким парам может помочь только ИКСИ и опытный андролог может сразу это сказать.

Анализ на фрагментацию ДНК необходим парам с идиопатическим мужским бесплодием. Т.е. когда диагностика устанавливает, что причина в мужчине, однако не может объяснить причину, поставить диагноз и назначить лечение. Для пары с идиопатическим мужским бесплодием, фрагментация ДНК поможет сохранить время, не тратя его на неудачные попытки ЭКО, безрезультатные схемы лечения и общего укрепления организм. Не тратьте время на пустое волнение, отчаяние и пустое ожидание.

Почему происходит фрагментация ДНК сперматозоидов?

Одним из наиболее изученных механизмов повреждений цепочек ДНК является действие свободных радикалов (активных форм кислорода). Они окисляют молекулу ДНК, нанося ей тем самым ущерб.

Чтобы внести ясность: свободные радикалы и повреждения ДНК есть у всех мужчин. Но в норме таких повреждений не много, а свободным радикалам должны противостоять антиоксиданты.
Антиоксиданты защищают сперматозоиды, поглощая свободные радикалы. Ими богата семенная плазма — жидкость, в которой “плавают” сперматозоиды.

Чтобы выяснить как много таких потенциально опасных свободных радикалов в сперме мужчины, выполняют Исследование активных форм кислорода в нативном эякуляте (ROS) (т.е. так как он есть) или Исследование активных форм кислорода в отмытых сперматозоидах (ROS), отмывая сперматозоиды от семенной плазмы. Какой именно тест следует провести — может подсказать врач.

Чтобы выяснить насколько хорошо антиоксиданты противостоят свободным радикалам, выполняют анализ на антиокислительную активность семенной плазмы.

Что влияет на повышение фрагментаций ДНК?

1. Внешние факторы:

радиация и токсические химические вещества;
перенесенные инфекции, в том числе передающиеся половым путем;
неблагоприятные климатические и экологические условия в районе проживания;
стресс и нездоровое питание;
курение, злоупотребление алкоголем;
варикоцеле;
возраст мужчины старше 40–45 лет;
хронические заболевания органов мочеполового тракта;
химиотерапия;
генетическая предрасположенность.

2. Внутренние факторы:

неполное созревание мужских половых клеток;
в норме мужской организм сам отбраковывает большую часть некачественных сперматозоидов, и в эякулят попадают лишь единицы из них. Если по какой-то причине в работе системы по отбраковке происходит сбой, в сперме оказывается гораздо больше «больных» половых клеток. От этого качество эякуляции не страдает, но снижается вероятность успешного оплодотворения.

Существуют данные исследований, подтверждающие, что женская яйцеклетка, оплодотворенная сперматозоидом с фрагментированной ДНК, способна «вылечить» его, восстановить поврежденную генетическую структуру. Но успех такого «лечения» определяется, в первую очередь, биологическим возрастом и состоянием здоровья женщины. Только молодые яйцеклетки, имеющие высокий потенциал к восстановлению ДНК сперматозоида, способны устранить подобный дефект. Кроме того, большое значение имеют степень разрушения и характер повреждений генетических структур.

Анализы фрагментации ДНК сперматозоидов: HALO или TUNEL?

Главное различие между этими анализами заключается в том, что HALO подсвечивает сперматозоиды с «целой» ДНК, а TUNEL — с поврежденной. Есть так же отличие в чувствительности тестов в пользу HALO и времени выполнения. На анализ фрагментации ДНК методом HALO требуется в 5-7 раз меньше времени.
Индекс фрагментации в отличие от спермограммы показывает нарушения целостности цепочек ДНК. Поврежденная ДНК часто может быть у мужчин с хорошими результатами спермограммы. Потому что сама молекула ДНК никак не влияет на основные параметры, тестируемые при анализе спермограмма: морфология, подвижность, количество сперматозоидов.

Почему анализы разные?

Как только была обнаружена значимая взаимосвязь фрагментации ДНК с проблемами на ранних сроках беременности, начались поиски универсального анализа. Новые методы анализа и исследований фрагментации ДНК появляются каждый год. Все они должны пройти клинические исследования, доказать свою диагностическую значимость. В лаборатории СПЕРМА-ТЕСТ определение Индекса Фрагментации ДНК проводится методом HALO (HALOSPERM) . Мы, как эксперты в области сперматологии рекомендуем использовать именно технологию HALO.

Что такое TUNEL-тест?

Tunel-тест – это микроскопическое исследование спермы, цель которого – обнаружить сперматозоиды с поврежденной ДНК и посчитать их количество.

Метод позволяет оценить масштаб повреждений ДНК в сперматозоидах. Сперма смешивается со специальным реактивом. Запускается ферментативная реакция. Разрывы цепочек ДНК сперматозоидов заполняются флуоресцирующим меченым нуклеотидом. Это видно под микроскопом, когда сперматолог считает сперматозоиды с фрагментированной ДНК.

Еще 2-3 года назад TUNEL-тест использовался повсеместно. Однако это был долгий и трудоемкий в выполнении тест. Сейчас более чувствительным и информативным считается тест HALO, что подтверждается клиническими исследованиями. А срок выполнения по сравнению с TUNEL сократился в 5-7 раз.

HALO-тест — это полная альтернатива тесту TUNEL. Новый тест быстрее и эффективнее. Поэтому мы рекомендуем использовать именно его. Однако не все андрологи и репродуктологи обадают информацией о HALO и требуют от пациентов результатов TUNEL-теста. Поэтому мы оставили TUNEL в списке услуг лаборатории.

Сдать анализ на фрагментацию ДНК (HALO): адрес, цена, сроки лаборатории.

HALO – это исследование, которое лучше выполнять в специализированной лаборатории, где работают сперматологи и эмбриологи, а не обычные лаборанты , соблюдаются международные стандарты проведения исследований и принципы доказательной медицины. Андрологи и репродуктологи не доверяют результатам сетевых лабораторий.

Сдать сперму для проведения HALO можно в лаборатории сперматологии Sperma-test.ru.
Стоимость HALO-теста (альтернатива TUNEL) – 7000 р.
Адрес лаборатории где можно сдать анализ:

Адрес: г.Москва ул.Беговая д.7
м.Беговая
Лаборатория сперматологии СПЕРМА-ТЕСТ

Записаться на прием и задать вопрос можно по телефону: +7 495 199-7554

источник

Что такое фрагментация ДНК в сперматозоидах, какой анализ ее выявляет и как вылечиться

Фрагментация ДНК сперматозоидов – дефект содержащегося в ядре мужской половой клетки генетического материала. Это серьезная и сложно корректируемая патология. При большом количестве таких сперматозоидов мужская сперма теряет фертильность (способность к оплодотворению). Даже современные методы искусственного оплодотворения (ЭКО и ИКСИ) зачастую оказываются бессильны. Выявить фрагментацию ДНК можно при помощи специальных микробиологических исследований эякулята.

Общие сведения

Молекула ДНК, по сути, является генетической инструкцией. В ней закодирован путь развития и функционирования любого живого организма. В сперматозоиде ДНК упакованы в виде особого вещества – хроматина, которое находится в ядре (в средней части головки).

ДНК состоит из двух спирально свитых друг с другом нитей (полинуклеотидов), состоящих из звеньев (нуклеотидов). Фрагментация – это ломка нитей, выпадение отдельных звеньев, вследствие чего нарушается генокод. Подобные микроповреждения не всегда влияют на способность сперматозоида проникать в яйцеклетку, но за таким оплодотворением последует самопроизвольный аборт или патологии развития плода.

Сперматозоиды с фрагментацией ДНК могут повреждать яйцеклетку и при протоколе ЭКО. В результате она теряет функциональность, эмбрион не образуется, протокол оплодотворения оканчивается неудачно. Если уровень фрагментации ДНК невысок, то в некоторых случаях молодая и здоровая яйцеклетка может восстановить структуру цепочки.

Причины фрагментации

Механизмы, которые приводят к фрагментации нитей ДНК, до сих пор до конца не исследованы. Одной из наиболее вероятных версий считается окислительный стресс сперматозоидов − повреждение их мембран, белков и ДНК свободными радикалами (активный кислород – ROS, или АФК). Последние являются продуктом обменных процессов в клетках, естественным компонентом среды, в которой вызревают сперматозоиды, и семенной плазмы. В норме радикалы нейтрализуются веществами-антиоксидантами, но в ряде случаев (при воспалительном процессе, иммунных нарушениях) баланс нарушается, активных форм кислорода становится слишком много. Выявить наличие АФК можно при помощи ROS-теста.

Основные причины окислительного стресса, приводящего к фрагментации ДНК:

Хронические воспалительные процессы в органах малого таза: яичках, их придатках, простате, мочевом пузыре, даже в копчике (инфекция легко мигрирует с кровотоком, периодически активизируясь).
Варикоцеле – расширение вен мошонки, приводящее к застою крови и нарушению питания яичек.
Длительное воздержание (чем дольше сперматозоид находится в придатке яичка, тем выше вероятность его повреждения оксидантами).

Интоксикация (курение, алкоголь, пестициды, гербициды). Исследования (Mutat Res за 1996 г, № 351(2), стр. 199-203, Cancer Inst за 1997 г, № 89(3), стр. 238-244) выявили прямую зависимость между онкологическими заболеваниями у детей и курением их отцов (сперматозоиды которых подверглись окислительному повреждению ДНК).
Длительный прием медикаментов: препараты для лечения гипертонии, подагры, противосудорожные, метадон, некоторые антибиотики.
Аутоиммунные нарушения, при которых организм вырабатывает антитела против собственных половых клеток.
Злоупотребление кофе (более 300 г в день). Кофеин способен провоцировать повреждения ДНК и препятствовать восстановлению нитей.

У 40% мужчин с бесплодием выявляется повышенный уровень активных форм кислорода (Androl за 2012, №33(6), Fertil. Steril за 1995 № 64(4)), поэтому определение их уровня является важным этапом диагностики.

Диагностика

Оценку фрагментации ДНК спермограмма не дает. С помощью этого анализа невозможно определить качество генетического материала, который несет сперматозоид. Даже расширенная версия с морфологией по Крюгеру позволяет обнаружить лишь внешние патологии головки (сперматозоиды с поврежденной цепью ДНК внешне могут ничем не отличаться от нормальных). Согласно исследованиям (https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1110569016300607)10% мужчин с совершенно нормальной спермограммой не могут иметь детей именно из-за фрагментации ДНК, но им диагностируют идиопатическое (без видимых причин) бесплодие.

Тест на ДНК-фрагментацию позволяет парам выявить причину бесплодия и самопроизвольных абортов на ранних сроках. Анализ сперматозоидов на ДНК-фрагментацию перед ЭКО необходим для определения следующих параметров:

Частота оплодотворения яйцеклетки.
Качество предимплантационного развития эмбрионов.
Вероятность развития врожденных пороков плода и выкидышей на ранних сроках.

В зависимости от результатов определяют целесообразность применения того или иного метода ЭКО.

Частота наступления беременности для пациентов с разной степенью фрагментации ДНК

Тест на ДНК-фрагментацию особенно актуален для мужчин, которые решили завести ребенка в позднем возрасте. После 45 лет риск окислительных повреждений сперматозоидов существенно увеличивается. В зоне повышенной опасности мужчины с артериальной гипертензией, сахарным диабетом, ожирением.

Типы тестов и расшифровка результатов

Исследование сперматозоида на наличие повреждений ДНК относится к области геномики и микробиологии. В андрологии и репродуктологии применяют следующие типы тестов:

TUNEL. Устаревший метод, который по-прежнему практикует большинство лабораторий. Для выявления пробелов в цепочке ДНК используется светооптический эффект. Отдельные нуклеотиды маркируются и помещаются в образец спермы. Там они находят сперматозоиды с поврежденными сегментами цепочек и встраиваются в них. Половые клетки с вклинившимися в ДНК нуклеотидами будут светиться, лаборантам остается вычислить их процент в общей массе. Результат будет готов через 2 недели (в некоторых лабораториях срок продлевается до трех).
HALO (HALOSPERM-тест, SCD). В отличие от предыдущего метода подсвечиваются не битые, а целые ДНК. Сперму смешивают с реактивом, в результате чего вокруг нормальных сперматозоидов образуется хорошо заметный ореол (на фото ниже). Метод считается наиболее чувствительным. Результат будет готов через 1-3 дня.
SCSA. Сперматозоиды просвечивают лазерным лучом, под воздействием которого они окрашиваются в зависимости от степени повреждений ДНК: зеленый – норма, желтый – несущественные повреждения, красный – серьезные дефекты. Референсное (среднее для здорового мужчины) значение – 20% (меньше – норма, больше – высокий уровень фрагментации).

Анализ ДНК методом HALO

Тест проводится только совместно со спермограммой. Некоторые лаборатории позволяют предоставить предыдущий результат анализа, выполненного не более двух дней назад. Подготовка к сдаче теста на фрагментацию такая же, как и перед обычной спермограммой.

Цены в популярных медучреждениях (по умолчанию указана стоимость методом TUNEL без учета цены спермограммы):

«ДНКом»: 8340 руб.;
«Инвитро»: 8620 руб.;
«Сперматест»: 6900 руб. за HALO, 7900 руб. за TUNEL.

По завершении исследования формируется протокол, где указывается индекс фрагментации – процентное соотношение между здоровыми и дефектными сперматозоидами (DNA Fragmentation Index (DFI)). Пример заключения и референсные значения:

Заключение теста ДНК-фрагментации, выполненного методом TUNEL

Интерпретация результатов исследования, выполненного методом HALO:

50%: потребуется отбор и искусственное введение сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ).
> 60%: вероятность успешного протокола ИКСИ крайне низка, рекомендуется донорская сперма.

Для определения причин фрагментации назначают УЗИ органов малого таза, исследования спермы, простатического сока, крови и мочи на наличие инфекций.

Лечение фрагментации ДНК сперматозоидов

Методы лечения зависят от выявленной причины. Если БАК-посев или микроскопическое исследование показали наличие инфекции, то назначают курс антибиотиков. Варикоцеле, нарушение проходимости уретры, крипторхизм лечат путем хирургического вмешательства.

Уровень фрагментации ДНК можно снизить при помощи антиоксидантной терапии (Cochrane Database Syst Rev (сборник баз данных по медицине, «библиотека Кокрейна») 2011 г № 1, CD007411). В центре вспомогательных репродуктивных технологий было выполнено пилотное исследование, в ходе которого было проанализировано 32 неудачных протокола ЭКО + ИКСИ (Источник: «Экспериментальная и клиническая урология», № 3 за 2017 г, стр. 70-76). У мужчин диагностирована низкая фертильность спермы: олигоастенотератозоспермия (малоподвижные сперматозоиды с нарушенным строением) при высоком уровне фрагментации ДНК (более 30%). Средние значения фрагментации и АФК были 38% и 4,6 соответственно.

Пациентам была предложена антиоксидантная терапия, включающая ежедневный прием следующих препаратов:

Селен (100 мг);
L-карнитин (3000 мг);
Витамины группы Е (токоферолы и токотриенолы в количестве 400 МЕ).
Витамин С (1000 мг).